Master Mix pour PCR vert Platinum™ SuperFi II
Master Mix pour PCR vert Platinum™ SuperFi II
Invitrogen™

Master Mix pour PCR vert Platinum™ SuperFi II

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Le mélange Invitrogen Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix (2X) contient un mélange prêt à l’emploi de l’ADN polymérase Platinum SuperFi II, du tampon Platinum SuperFi II et des dNTP pour une configuration PCR pratique, ainsi que deux colorants de suivi pour le chargement direct des produits PCR sur gels. L’ADN polymérase Platinum SuperFi II est une ADN polymérase de correction qui associe une fidélité supérieure à un tampon SuperFi II innovant, permettant une hybridation d’amorce universelle pour un succès optimal en PCR. Il est parfaitement adapté au clonage, à la mutagénèse et à d’autres applications bénéficiant d’une précision de séquence suprême.

Caractéristiques du mélange Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix :
• Fidélité exceptionnelle >300X Taq
• Hybridation d’amorces universelles à 60°C
• Une spécificité, une sensibilité et des rendements supérieurs
• Amplification robuste des cibles difficiles à amplifier (par exemple, celles ayant une pureté sous-optimale, une teneur en GC > 65 %, une exigence d’une PCR longue)

L’ADN polymérase Platinum SuperFi II est une enzyme à haute processivité avec une résistance accrue aux inhibiteurs de la PCR. Elle permet également des protocoles de cyclage rapide et l’amplification de cibles longues (jusqu’à 20 kb). La technologie de démarrage à chaud Platinum est basée sur des anticorps exclusifs qui inhibent l’activité enzymatique jusqu’à l’étape initiale de dénaturation de la PCR, empêchant ainsi l’amplification et la dégradation d’amorces non spécifiques. Cette technologie permet également la configuration de la réaction à température ambiante et offre une sensibilité et un rendement accrus.

En raison de la composition unique du tampon PCR SuperFi II, la température d’hybridation est de 60°C pour la plupart des paires d’amorces conçues selon les règles générales de conception. L’isostabilisation des molécules dans le tampon augmente la stabilité du duplex amorce-modèle pendant l’étape d’hybridation et améliore la spécificité sans qu’il soit nécessaire d’optimiser la température d’hybridation pour chaque paire d’amorces. Avec l’ADN polymérase Platinum SuperFi II, différents dosages PCR peuvent être effectués dans le même cycle en utilisant le même protocole avec une température d’hybridation d’amorce universelle et l’étape d’extension sélectionnée pour le fragment le plus long à amplifier.

Applications de l’ADN polymérase Platinum SuperFi II :
• PCR haute fidélité
• Clonage et sous-clonage
• Mutagénèse dirigée
• Amplification des modèles riches en GC
• Génération de modèles pour le séquençage
• PCR à haut débit
• Amplification des échantillons avec une pureté sous-optimale
• PCR longue
• PCR rapide

Le mélange Platinum SuperFi II PCR Master Mix est également disponible. Il s’agit du même Master Mix sans les colorants de suivi.

Plus d’informations sur les produits d’ADN polymérase Platinum SuperFi II ›
Spécifications
CouleurGreen
Fidélité (par rapport à Taq)> 300X
Hot StartFonctionnalité Hot-Start (démarrage à chaud) intégrée
Nbre de réactions5 x 500 réactions
En surplombArrondi
PolyméraseADN polymérase Platinum SuperFi II
Type de produitMaster Mix de PCR
Quantité5 x 500 reactions
Format de réactionSuperMix ou Master Mix
Conditions d’expéditionGlace carbonique
Taille (produit final)20 kb ou moins
Concentration2X
À utiliser avec (application)Hot-start PCR, High-fidelity PCR
GC-Rich PCR PerformanceÉlevé
Vitesse de réactionRapide
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Cinq boîtes de Master Mix PCR Platinum SuperFi II Green, chacune contenant :
  • Master Mix PCR Platinum SuperFi II, 10 x 1,25 ml
  • 10 x 1,25 ml d’eau, exempte de nucléase
Suffisant pour 2 500 réactions de 50 µl

Foire aux questions (FAQ)

How much volume of the Platinum SuperFi II PCR Master Mix (2X) or Platinum SuperFi II PCR Green Master Mix (2X) should I use per reaction?

Typically, for a 50 µL PCR reaction, we recommend using 25µµL of the 2X master mix so that its final concentration in the reaction is 1X.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

What is the best way to quantify your PCR samples using the Platinum SuperFi II PCR Master Mix, Green (Cat, No. 12369250, 12369010, 12369050)? Is it possible to quantify using Tapestation or a Qubit fluorometer?

The dyes in the Platinum SuperFi II Green PCR Master Mix can interfere with the fluorescent readings on both Qubit fluorometer and Tapestation. To accurately quantify your samples, you should first use a PCR purification kit, such as the GeneJet PCR Purification Kit (Cat. No. K0701), to clean up your samples. Alternatively, you can use the Platinum SuperFi II PCR Master Mix (Cat. No. 12368010) which does not contain the interfering dyes, thus eliminating the need for a purification step.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

What are your recommendations when working with long amplicons using Platinum SuperFi II DNA Polymerase?

Good lab practices are important for long fragment amplification. These include using high-quality templates (pure, fresh, and intact) and fresh primer solutions. Reducing primer concentration to 0.2 µM may also improve the results.

Can I use Platinum SuperFi DNA Polymerase cycling protocol and primer annealing temperature with Platinum SuperFi II DNA Polymerase?

Yes, Platinum SuperFi II DNA Polymerase works at both universal 60 degrees C annealing temperature and at annealing temperatures calculated with a Tm calculator.

Can I perform TA cloning with Platinum SuperFi II DNA Polymerase?

Platinum SuperFi II DNA Polymerase produces blunt-ended PCR products that can be cloned directly into blunt-ended cloning vectors. TA cloning is also possible if 3' dA-overhangs are added after PCR. We recommend purifying the PCR products of Platinum SuperFi DNA Polymerase before adding the overhangs. The procedure for adding 3' dA-overhangs (TA cloning) includes the following steps:
- Purify the PCR product (e.g., with a PCR purification kit or phenol extraction/DNA precipitation). Before adding the overhangs, PCR product must be purified, as the strong proofreading activity of any remaining Platinum SuperFi DNA Polymerase will degrade the added 3' dA-overhangs.
- Perform 3' dA addition with a Taq DNA polymerase.
Reaction components:
Purified PCR product
0.2 mM dATP
1x Taq Buffer
1 U Taq DNA Polymerase
Incubate the reaction for 20 min at 72 degrees C.
- Proceed to TA cloning. For optimal ligation efficiency, we recommend using fresh PCR products, since 3' dA-overhangs can be lost during storage

Citations et références (1)

Citations et références
Abstract
Evaluation of a Yeast Two-Hybrid Library by High-Throughput Sequencing.
Authors:Yu Q, Hu Y, Su J, Li P, Zhang L, Fu X, Chen F, Song A
Journal:J Proteome Res
PubMed ID:32442380
'Yeast two-hybridization (Y2H) is a classical method to study protein-protein interactions in organisms, and the top limitation of Y2H is the high ratio of false negatives and false positives. The most efficient way to reduce this error is to improve the quality of the library. The traditional library quality evaluation ... More