La NHS-Desthiobiotine Thermo Scientific EZ-Link est un réactif de marquage court perméable à la membrane et réactif aux amines, dont le groupe semblable à la biotine est éluable à partir de la streptavidine, ce qui le rend idéal pour le marquage et la purification des protéines intracellulaires.

Caractéristiques de la NHS-Desthiobiotine EZ-Link :

• Desthiobiotine : l’analogue de biotine permet une élution facile de la streptavidine, une fonction idéale pour les applications de purification par affinité
• Marquage des protéines : marquage des anticorps ou des protéines dans des échantillons purifiés ou mélangés pour permettre une récupération élevée dans les dosages d’extraction avec des microbilles de streptavidine
• Perméable à la membrane : réaliser un marquage intracellulaire avec des cellules intactes, car le petit réactif non chargé se diffuse facilement à travers les membranes cellulaires
• Réactif aux amines : réagit avec les amines primaires (-NH2), telles que la chaîne latérale des lysines (K) ou les extrémités amino des polypeptides

NHS-Desthiobiotine est une variante de la biotine qui est activée comme un ester NHS pour marquer de manière covalente les amines primaires (-NH2) de protéines ou d’autres molécules avec des groupes desthiobiotine. Le marqueur de la desthiobiotine se lie à la streptavidine et à d’autres protéines liant la biotine à haute spécificité mais s’élue facilement avec des conditions douces (par ex., par déplacement compétitif avec la biotine stable et libre). À ce titre, ce réactif est une alternative utile à la NHS-Biotine (réf. 20217) pour les techniques d’avidine-biotine dans lesquelles l’élution non dénaturante des protéines marquées est souhaitée. Cette variété la plus simple et la plus petite de réactif de desthiobiotine réactif aux amines est non chargée et perméable à la membrane cellulaire ; par conséquent, la NHS-Desthiobiotine peut être utilisée avec des cellules intactes pour le marquage des protéines intracellulaires.

Desthiobiotine vs biotine
La desthiobiotine est un analogue de la biotine sans soufre à cycle unique qui se lie à la streptavidine avec une spécificité presque égale, mais avec moins d’affinité que la biotine (1 / Kd = 10^11 vs 10^15 M, respectivement) [1-2]. Par conséquent, les protéines d’appât déthiobiotinylées et leurs partenaires en interaction peuvent être facilement et spécifiquement éluées de la résine d’affinité de streptavidine en utilisant des conditions douces basées sur un déplacement compétitif avec la biotine libre. Pour les expériences de dosage par extraction avec des échantillons biologiques, cette caractéristique de libération douce de la desthiobiotine permet également de minimiser la co-purification de molécules biotinylées endogènes, qui restent liées à la streptavidine lors de l’élution des complexes protéiques cibles avec la biotine libre. Le système d’affinité avidine-biotine modifié élimine également la nécessité d’utiliser des conditions d’élution difficiles qui peuvent dissocier des complexes et/ou endommager la protéine ou la cellule cible. Les techniques basées sur la desthiobiotine sont idéales lorsque vous utilisez des protéines natives ou recombinantes qui ne sont pas exprimées avec une étiquette de fusion et lorsque vous isolez des protéines capturées dans des conditions natives, telles que le ciblage de cellules intactes ou de protéines de surface cellulaire.

Marquage avec les réactifs d’ester NHS 
les esters N-hydroxysulfosuccinimide (NHS) de biotine sont le type de réactif de biotinylation le plus populaire. Les biotines activées par NHS réagissent efficacement avec les groupes amines primaires (-NH2) des tampons alcalins pour former des liaisons amides stables. Les protéines présentent généralement plusieurs amines primaires qui peuvent servir de cibles au marquage, notamment la chaîne latérale de la lysine (K) et les extrémités N-terminal de chaque polypeptide. La plupart des esters sulfo-NHS sont directement hydrosolubles mais ne sont pas perméables à la membrane. Les esters NHS simples sont moins solubles dans des tampons aqueux mais perméables à la membrane.