EZ-Link™ NHS-Biotin

Thermo Scientific EZ-Link LC-Biotin ist das einfachste durch NHS-Ester aktiviertes Biotinylierungsreagenz zur Markierung von primären Aminen (z. B. Proteinlysinen), deren Membrangängigkeit die Verwendung für die allgemeine intrazelluläre Markierung ermöglicht.

Merkmale von EZ-Link LC-Biotin:

• Proteinmarkierung—Biotinylierter Antikörper oder andere Proteine für den Nachweis oder die Reinigung mit Streptavidin-Sonden oder Harzen
• Membrangängig— wird für Markierungen innerhalb von Zellen (intrazellulär) verwendet
• Aminreaktiv—reagiert mit primären Aminen (-NH2) wie die Seitenketten von Lysinen (K) oder die Amino-Enden von Polypeptiden
• Irreversibel—bildet dauerhafte Amid-Bindungen; Spacerarm kann nicht gespalten werden
• Löslichkeit—muss vor der weiteren Verdünnung in wässrigen Puffern in DMSO oder DMF aufgelöst werden
• Sehr kurz—Spacerarm (Gesamtlänge zum Ziel hinzugefügt) beträgt 13,5 Angström; er besteht aus der nativen Biotin-Valeriansäure-Gruppe.

NHS-LC-Biotin ist N-Hydroxysuccinimidobiotin. Es ist das kürzeste von drei ähnlichen EZ-Link NHS-Biotinreagenzien, die eine einfache und effiziente Biotinylierung von Antikörpern, Proteinen und anderen primäraminhaltigen Biomolekülen in Lösung ermöglichen. Die drei sich nur in der Länge ihrer Spacerarme unterscheidenden NHS-Ester-Reagenzien können Markierungs- und Nachweisexperimente optimieren, bei denen die sterische Hinderung der Biotinbindung ein bedeutender Faktor ist. Da sie nicht geladen sind und Spacerarme aus einfachen Alkylketten enthalten, sind diese Biotinverbindungen membrangängig und nützlich für die intrazelluläre Markierung.

Unsere Biotin-Reagenzien sind auf höchstmögliche Produktintegrität, -konsistenz und -leistung in den entsprechenden Forschungsanwendungen ausgerichtet.

N-Hydroxysulfosuccinimid (NHS) Ester von Biotin sind die am häufigsten eingesetzten Biotinylierungsreagenzien. NHS-aktivierte Biotine reagieren effizient mit primären Aminogruppen (-NH2) in alkalischen Puffern und bilden stabile Amidbindungen. Proteine (z. B. Antikörper) haben in der Regel mehrere primäre Amine, die als Kennzeichnungsziele zur Verfügung stehen, einschließlich der Seitenkette von Lysinrückständen (K) und des N-Endterminus jedes Polypeptids.

Biotinvielfalt NHS-Ester unterscheiden sich in Länge, Löslichkeit, Zelldurchlässigkeit und Spaltbarkeit. Nicht sulfonierte NHS-Biotine sind zellpermeabel, müssen jedoch in einem organischen Lösungsmittel wie DMSO oder DMF gelöst werden. Sulfo-NHS-Biotine (und solche mit pegyliertem Spacer) sind direkt wasserlöslich, können jedoch nicht die Zellmembran durchdringen. Varianten mit Disulfidbrücken können mithilfe von Reduktionsmitteln gespalten werden, sodass die Biotin-Gruppe vom markierten Protein getrennt werden kann.