Le Ni-NTA-agarose Superflow Thermo Scientific HisPur est un support Superflow 6 modifié par de l’acide nitrilotriacétique (NTA) chargé avec des cations nickel divalents (Ni⁺²) destiné à la purification par FPLC des protéines étiquetées poly-histidine.

Caractéristiques de Ni-NTA-agarose Superflow HisPur :

• Haute capacité—liaison de plus de 20 mg de GFP étiquetée poly-His par ml de résine à un débit linéaire de 300 cm/heure
• Grande pureté—pureté des fractions éluées supérieure à 80 % pour les purifications à partir de lysats
• Polyvalent—utilisable pour la purification des protéines en conditions natives et dénaturantes
• Robuste—billes d’agarose hautement réticulé pouvant tolérer des débits linéaires allant jusqu’à 1 200 cm/heure
• Compatible—résine toujours fonctionnelle après exposition à un large éventail de produits chimiques et de valeurs de pH
• Économique—résine à prix compétitif résistant à plusieurs cycles de lavage et de réutilisation

Le Ni-NTA-agarose Superflow HisPur est une résine résistante hautement réticulée qui ne se comprime pas aux débits utilisés pour les purifications par FPLC à moyenne et grande échelle. La résine tolère un large éventail de produits chimiques et de valeurs de pH et est compatible avec les lavages en place. Comparé au cobalt et aux autres ligands utilisés pour la chromatographie par affinité pour ions métalliques immobilisés (IMAC), le nickel possède une capacité de liaison supérieure pour la purification des protéines étiquetées poly-His. Grâce à sa haute capacité de liaison dynamique sur une large plage de débits, le Ni-NTA-agarose Superflow HisPur est un excellent choix pour les purifications à grande échelle.

Applications :
• Purification par FPLC à moyenne et grande échelle de protéines étiquetées avec un poly-histidine

La chromatographie par affinité est un moyen facile et rapide de purifier les protéines recombinantes. Une de ces méthodes de purification implique la liaison d’une étiquette poly-histidine à un cation métallique divalent coordonné avec un chélateur immobilisé sur un support sous forme de billes. Pour la purification de protéines étiquetées His par chromatographie par affinité pour ions métalliques immobilisés (IMAC), le type de bille, le chélateur et le cation métallique immobilisé ont une grande influence sur la pureté, le rendement et le débit.

Le Ni-NTA-agarose Superflow HisPur est un support Superflow 6 modifié par de l’acide nitrilotriacétique (NTA) chargé avec des cations nickel divalents (Ni2+) destiné à la purification par FPLC des protéines étiquetées poly-histidine. Pour démontrer l’efficacité de la résine, une protéine de fusion 6xHis-GFP a été exprimée dans un réacteur de 100 L, puis la masse cellulaire a été récoltée en plusieurs fractions. Une partie de la biomasse (240 g) a été lysée avec 2 L de tampon de lyse complété par de l’inhibiteur de protéase Thermo Scientific Halt (référence : 78439). Après clarification, le lysat a été divisé en deux fractions. La protéine cible a ensuite été purifiée à l’aide de l’agarose HisPur Ni-NTA Superflow et d’une résine d’un autre grand fabricant dans des colonnes équivalentes de 200 ml garnies de microbilles. Le rendement total, le taux de récupération et la pureté (> 80 %) étaient pratiquement identiques pour les deux résines, et plus de 4 grammes de protéines cibles ont pu être purifiés en moins de 3 heures.

Plus d’informations sur le produit
• Caractérisation des performances de l’agarose HisPur Ni-NTA Superflow

Produits associés
Résine HisPur™ Ni-NTA