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Référence | Taille de l’unité | Prix (EUR) | Disponibilité | Quantité | |
---|---|---|---|---|---|
33073 | 8 reactions | 715,26 Prix en ligne 786,00 | - |
Protocole type pour une expérience de transfert de marquage :
• Ajoutez quelques microlitres de réactif sulfo-SBED dissous avec 0,5 à 1 ml de protéine appât purifiée dans du PBS.
• Incuber le mélange dans l’obscurité, sur la glace ou à température ambiante, pendant 30 à 120 minutes.
• Dessalez ou dialysez (avec un éclairage tamisé) pour séparer le surplus de sulfo-SBED n’ayant pas réagi de la protéine “appât” marquée.
• Ajoutez la protéine appât marquée au lysat cellulaire ou à toute autre solution contenant de potentielles protéines cibles de liaison (“proie”).
• Lorsque des complexes d’interaction se sont formés, exposez la solution à une lumière ultraviolette (365 nm) pendant plusieurs minutes.
• Analysez les produits à l’aide de l’une des méthodes suivantes :
• Transfert Western : Clivez les produits de réticulation dans du DTT, séparez les protéines par SDS-PAGE, et détectez les bandes biotinylées par transfert Western à l’aide de la streptavidine-HRP.
• Purification suivie d’une analyse par spectrométrie de masse ou un séquençage : Purifiez par affinité les protéines biotinylées ou les fragments de peptides biotinylés après une digestion trypsique, et effectuez l’analyse MS ou le séquençage pour caractériser les protéines impliquées.
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Réactif de transfert de marquage à la biotine sulfo-SBED