Pierce™ IgM Purification Kit

Le kit de purification d’IgM Thermo Scientific Pierce est un système de tampon et de matrice d’affinité facile à utiliser, permettant de purifier des IgM issues de liquide d’ascite de souris ; la méthode utilise une protéine de liaison du mannose immobilisée, qui se fixe aux IgM dans les tampons fournis dans le kit.

L’agarose MBP Pierce est une protéine de liaison du mannose purifiée (également appelée lectine liant le mannose, MBL) qui a été immobilisée sur des billes d’agarose à 4 %. Lorsqu’elle est utilisée avec un système de tampon optimisé basé sur une liaison dépendante de la température et du calcium, cette résine permet la purification spécifique par affinité d’IgM de souris à partir de liquide d’ascite et d’autres échantillons concentrés. La résine et les tampons essentiels sont disponibles à l’unité ou regroupés dans un kit de purification d’IgM complet contenant une colonne préremplie d’agarose MBP de 5 ml.

Caractéristiques du kit de purification d’IgM :

• MBP immobilisée  : le système d’affinité basé sur la protéine de liaison du mannose (MBP) permet la purification spécifique d’IgM de souris à partir de liquide d’ascite ou de l’isolement partiel des IgM humaines du sérum
• Kit complet : le kit de purification des IgM comprend une colonne MBP préremplie et des tampons prêts à l’emploi pour une purification pratique d’au moins 1,5 mg d’IgM à partir de 0,5 ml d’échantillons d’ascite par colonne
• Conditions douces : les conditions de tampon non dénaturantes et quasi-neutres assurent la récupération des anticorps fonctionnels
• Réutilisable : les ligands et résines stables peuvent être régénérés et réutilisés au moins 10 fois sans diminution significative de la capacité de liaison

La protéine de liaison du mannose (MBP), également appelée lectine de liaison du mannose (MBL), est une lectine de mammifère produite dans le foie et présente dans le sérum. La protéine MBP est composée de 18 sous-unités identiques d’une masse moléculaire de près de 31 kDa chacune. La protéine est capable de déclencher l’activation du complément médiée par les glucides.

Le protocole du kit de purification d’IgM basé sur la MBP immobilisée est le plus efficace pour purifier les IgM de souris issue du liquide d’ascite, bien qu’il permette également la purification partielle des IgM humaines à partir du sérum. Les étapes de liaison et d’élution dépendent de la température et du taux de calcium. Les étapes de liaison et de lavage sont effectuées à 4°C dans un tampon Tris contenant 20 mM de chlorure de calcium. L’élution est obtenue à température ambiante dans un tampon Tris contenant de l’EDTA, mais pas de chlorure de calcium. Le protocole est facile à utiliser. Il produit des IgM de souris purifiées à 90 % à partir de liquide d’ascite. La protéine MBP peut être régénérée au moins 10 fois sans aucune baisse significative de la capacité de liaison. Les IgM humaines se fixent également au support mais avec une capacité légèrement inférieure et une copurification des IgG. Le système de purification n’a pas été testé ni validé pour une utilisation avec d’autres espèces et sources d’échantillons.

Produits associés
Agarose de protéine de liaison du mannose Pierce™
Tampon de préparation de colonne MBP pour kit de purification d’IgM Pierce™
Tampon d’élution pour kit de purification d’IgM Pierce™