La protéine porteuse Blue Carrier Imject est une hémocyanine hautement soluble obtenue à partir de mollusques, qui facilite la préparation d’immunogènes efficaces avec des antigènes aminés peptidiques et carboxyliques peptidiques

Caractéristiques de la protéine porteuse Blue Carrier Imject :

• Conjugaison à haut rendement : chaque molécule de CCH contient des centaines d’amines primaires disponibles pour le couplage d’haptènes via les agents de réticulation EDC ou NHS-ester
• Qualité validée : la protéine porteuse immunogène est spécialement purifiée afin d’assurer une structure chimique et une solubilité uniformes pour une performance constante
• Solubilité supérieure : la solubilité accrue par rapport à la KLH permet d’utiliser la protéine porteuse Blue Carrier dans un plus grand nombre de protocoles de conjugaison pour s’adapter à des haptènes rares ou peu solubles
• Hautement immunogène : offre essentiellement le même niveau d’immunogénicité et la même distance phylogénétique que l’hémocyanine de patelle (KLH)

La protéine porteuse Blue Carrier est une préparation purifiée d’hémocyanine de Concholepas concholepas (CCH) qui confère une immunogénicité élevée aux antigènes conjugués pour l’injection et l’immunisation dans les procédures de production d’anticorps. Cette grosse protéine est dotée de la plupart des propriétés immunogènes de la célèbre protéine porteuse, l’hémocyanine de patelle (KLH). Cependant, sa solubilité, bien meilleure, confère une bien plus grande souplesse dans les protocoles de préparation immunogène. Elle permet en effet l’utilisation d’un plus grand éventail de tampons et de conditions de pH pour le couplage de peptides, de protéines et autres haptènes à l’aide de réticulateurs classiques tels que le glutaraldéhyde, le sulfo-SMCC et l’EDC. La protéine porteuse EDC Blue Carrier Thermo Scientific Imject s’accompagne d’un kit de centrifugation qui facilite la préparation des immunogènes.

Propriétés de la protéine porteuse Blue Carrier :

• Noms alternatifs : Hémocyanine de Concholepas concholepas, CCH
• Poids moléculaire : Molécule entière : ∼ 8 000 000 ; sous-unités : ∼ 400 000 et ∼ 350 000
• Absorption : maxima à 280 nm, 350 nm et 558 nm
• Coefficient d’extinction (A solution de 1 mg/ml) : 1,4 à 280 nm ; 0,35 à 346 nm
• Rapport A280/A350 : ∼ 4,0
• Rapport cuivre/protéine : ∼ 16 Cu²⁺ par molécule de protéine
• Point isoélectrique : 6,0
• Solubilité : Soluble dans les tampons aqueux : pH de 7,0 à 8,0
• Stabilité : Stable dans les tampons aqueux : pH de ∼ 7,2 sans Ca²⁺ ou Mg²⁺

Les protéines porteuses sont des molécules grandes et complexes, capables de stimuler une réponse immunitaire lors d’une injection. Une bonne production d’anticorps spécifiques de petits antigènes (comme les peptides ou les composés pharmaceutiques) nécessite la conjugaison covalente de ces haptènes à une molécule plus grosse et plus complexe (généralement une protéine) pour les rendre immunogènes. Les protéines porteuses sont choisies en fonction de leur immunogénicité, leur solubilité et leur capacité à atteindre un niveau adéquat de conjugaison de protéines porteuses d’haptènes.

La protéine porteuse Blue Carrier est une hémocyanine ayant fait l’objet d’une purification spéciale et provenant du mollusque Concholepas concholepas. La protéine CCH est composée de deux sous-unités polypeptidiques très grandes (404/351 kDa) qui forment une structure dodécamérique hétérogène extrêmement stable même en l’absence de cations divalents. (En revanche, la KLH présente une structure dodécamérique homogène moins stable et moins soluble.) L’organisation moléculaire complexe des sous-unités de CCH contient diverses structures antigéniques répétées provoquant une forte réaction immunitaire médiée par les lymphocytes T et B.

En raison de leur grande taille et de leur complexité moléculaire, les hémocyanines KLH et CCH sont des protéines porteuses idéales à utiliser comme immunogènes pour la production d’anticorps contre les haptènes et les peptides. En outre, des études suggèrent que la forte réponse immunitaire d’hypersensibilité retardée (DTH, Delayed Type Hypersensitivity induite par les hémocyanines chez les animaux et les humains aurait des effets thérapeutiques bénéfiques dans certains types de cancer. De nouveaux développements en immunothérapie du cancer ont tiré parti des propriétés immunogènes uniques des hémocyanines afin de développer de nouveaux vaccins conjugués pour le traitement des maladies émergentes.

L’EDC de réticulation carbodiimide conjugue les haptènes contenant du carboxyle (p. ex., l’extrémité carboxylique des antigènes peptidiques) à la protéine porteuse BSA. Cette méthode de préparation immunogène est idéale pour les peptides antigéniques avec peu ou pas de résidus d’acide aspartique et glutamique (carboxylates) et de résidus lysine (amines primaires) au sein de la portion centrale de la séquence primaire. Les peptides contenant des carboxylates et des amines, la conjugaison d’EDC provoque une polymérisation variée et une orientation aléatoire de ces polymères dans leur liaison à la protéine porteuse. Généralement, cela se traduit par le chargement d’un taux élevé d’antigènes sur la protéine porteuse ainsi que par une présentation selon toutes les orientations possibles pour la production d’anticorps. Cependant, d’importants épitopes (souhaités) au sein de la séquence du peptide antigénique peuvent être bloqués par la conjugaison médiée par l’EDC si ces régions contiennent des amines primaires (résidus lysine) ou des carboxylates (résidus d’acides aspartiques et glutamiques). Dans ces cas, utilisez soit un réticulateur réactif à l’amine homobifonctionnel avec le Blue Carrier purifié dans un tampon phosphate, soit synthétisez le peptide avec une cystéine terminale unique et utilisez un kit avec le Blue Carrier activé par maléimide pour préparer le conjugué protéique porteur.

Autres données sur les produits
• Données sur l’activation des protéines portatives et la conjugaison pour la préparation d’immunogènes

Produits connexes
Protéines Imject™ Blue Carrier™ (en PBS stérile)
Kit de centrifugation de protéines Imject™ EDC Blue Carrier™