Réactifs d’extraction cytoplasmique et nucléaire NE-PER™

Le kit Thermo Scientific NE-PER pour l’extraction cytoplasmique et nucléaire permet d’obtenir une lyse cellulaire efficace et l’extraction distincte des fractions cytoplasmique et nucléaire en moins de deux heures.

Caractéristiques du kit NE-PER pour l’extraction cytoplasmique et nucléaire :

• Rapide : obtenez des fractions cytoplasmiques et nucléaires de protéines solubles en moins de deux heures
• Efficacité éprouvée : le kit de réactif NE-PER est référencé dans plus de 950 publications
• Polyvalence : la protéine nucléaire des cellules ou des tissus de culture (destinée aux échantillons frais uniquement)
• Évolutif : deux tailles de kits pour produire des extraits à partir de cellules et de tissus
• Pratique : des instructions simples qui ne nécessitent pas d’ultracentrifugation sur les gradients
• Compatible : pour les dosages biologiques en aval (transferts Western, retards sur gel, dosages de protéines, de gènes rapporteurs et d’activités enzymatiques)

Le kit NE-PER est une méthode d’extraction des nucléoprotéines qui implique la lyse simple et progressive des cellules et l’isolement par centrifugation de fractions de nucléoprotéines et de protéines cytoplasmiques. Les seuls outils requis sont : une microcentrifugeuse de paillasse, des tubes et des pipettes. Les réactifs NE-PER solubilisent et séparent efficacement les nucléoprotéines et les protéines cytoplasmiques en fractions avec un minimum de contamination croisée ou d’interférence provenant de l’ADN génomique et de l’ARNm. Une fois dessalées ou diluées, les protéines isolées peuvent être utilisées pour réaliser des immunoessais et des expériences sur l’interaction des protéines, par exemple les analyses de mobilité (EMSA), la co-immunoprécipitation (Co-IP) et les dosages de co-précipitation.

Il existe une variété de méthodes disponibles pour isoler les noyaux et préparer les extraits de nucléoprotéines. La plupart des méthodes de préparation des extraits nucléaires sont des procédés longs nécessitant une homogénéisation mécanique, des cycles de congélation / décongélation, une centrifugation importante ou des étapes de dialyse qui peuvent compromettre l’intégrité des nucléoprotéines. Le kit de réactifs d’extraction nucléaire et cytoplasmique NE-PER est un protocole basé sur des réactifs qui permet la lyse progressive des cellules, la séparation du cytoplasme du noyau intact, puis l’extraction des nucléoprotéines qui se séparent de l’ADN génomique et de l’ARNm. Ce procédé doux prend moins de deux heures et ne nécessite qu’une centrifugeuse de paillasse standard quand vous utilisez des cultures cellulaires. De plus, aussi bien les nucléoprotéines actives que les protéines cytoplasmiques peuvent être rétablies aux valeurs de consignes à partir d’un même échantillon de culture cellulaire ou tissulaire.

Avec deux millions de cellules, le rendement typique en protéines cytoplasmiques est compris entre 200 et 500 µg et le rendement typique en protéines nucléaires entre 100 et 200 µg (à une concentration de 1 mg/ml). La contamination croisée type entre les fractions cytosoliques et nucléaires est d’environ 10 %. La méthode rétablit aux valeurs de consigne principalement les protéines solubles du noyau, pas tellement les protéines liées à la chromatine ou les protéines membranaires intégrales de l’enveloppe nucléaire. La concentration en protéines des extraits nucléaires peut être facilement manipulée en variant le volume de réactif d’extraction nucléaire (NER) utilisé dans l’extraction sans perte significative d’efficacité d’extraction. L’extraction spécifique de nucléoprotéines dans les cellules est au cœur de la réussite de nombreuses études de régulation des gènes. Tandis qu’il existe une variété de méthodes pour isoler les noyaux et préparer les extraits de nucléoprotéines, la plupart de ces méthodes représentent des procédés longs nécessitant une homogénéisation mécanique, des cycles de congélation / décongélation, une centrifugation importante ou des étapes de dialyse qui peuvent compromettre l’intégrité de bien des nucléoprotéines fragiles. Le kit NE-PER surmonte ces problèmes, en procurant des extraits de nucléoprotéines concentrés de grande qualité à utiliser dans les EMSA et autres techniques d’analyse.

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