Pierce™ Kinase Enrichment Kit with ATP Probe

Ce kit d’enrichissement en kinases Thermo Scientific Pierce utilise une sonde d’ATP ActivX™ pour marquer de façon covalente le site actif des ATPases, y compris les chaperons et les enzymes métaboliques, afin de permettre leur enrichissement sélectif à l’aide d’un marqueur de desthiobiotine.

Les sondes ATP ActivX sont dotées d’un analogue de nucléotides réactif aux amines et d’une étiquette de desthiobiotine (analogue de biotine) qui facilite le marquage sélectif des lysines sur le site actif de la kinase, puis l’enrichissement et la récupération ultérieurs des protéines marquées. Ces caractéristiques permettent d’identifier et de profiler les classes d’enzymes cibles dans des échantillons ou d’évaluer la spécificité et l’affinité des inhibiteurs enzymatiques.

Caractéristiques du kit d’enrichissement en kinases Pierce :

• Spécifique – marquage uniquement pour les lysines conservées sur le site actif des protéines liant les nucléotides
• Flexible – utilisation flexible pour le marquage in vitro des enzymes ATPase dérivées de cellules ou de tissus
• Compatible – utilisation compatible avec les flux de travail du transfert de Western ou de la spectrométrie de masse (MS)

Applications :
• Profilez les affinités de liaison des petites molécules et l’inhibition du site actif en fonction des doses.
• Identifiez des douzaines à des centaines de cibles d’inhibiteurs et de cibles secondaires des tissus, des cellules et des protéomes subcellulaires.
• Enrichissez les enzymes selon leur fonction.La desthiobiotine-ATP ActivX

Thermo Scientific est un dérivé nucléotidique qui modifie de façon covalente le site actif des enzymes à des résidus de lysine conservés dans le site de liaison des nucléotides. La structure de ces sondes se compose d’une biotine modifiée (desthiobiotine) reliée au nucléotide par une liaison acyl-phosphate labile. La desthiobiotine est un analogue de la biotine qui se lie moins étroitement aux protéines de liaison à la biotine, ce qui entraîne une liaison facilement inversée par le déplacement de la biotine, un pH faible ou une dénaturation thermique.

Les sondes Desthiobiotin-ATP peuvent être utilisées pour enrichir, identifier et profiler de façon sélective les classes d’enzymes cibles ou évaluer la spécificité des inhibiteurs enzymatiques. Étant donné que de nombreux ATPases et d’autres protéines liant les nucléotides permettent de se lier aux nucléotides ou aux inhibiteurs même lorsqu’ils sont inactifs sur le plan enzymatique, les sondes de desthiobiotine permettent d’établir le profil des enzymes actives et inactives d’un échantillon complexe. La préincubation des échantillons avec des inhibiteurs de petites molécules qui rivalisent pour les sites actifs peut être utilisée pour déterminer l’affinité de liaison des inhibiteurs. Les sondes nucléotidiques du site actif peuvent également être utilisées pour identifier les inhibiteurs secondaires.

Ces produits sont soumis à une licence restreinte.

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