Pierce™ Classic Magnetic IP/Co-IP Kit

Le kit d’IP / Co-IP magnétique classique Thermo Scientific Pierce permet une immunoprécipitation (IP) et une co-immunoprécipitation (co-IP) très efficaces et performantes des antigènes et des complexes protéiques en utilisant moins de 10 µg d’anticorps et un séparateur magnétique.

Caractéristiques du kit d’IP / Co-IP magnétique classique :

• Compatible : les microbilles magnétiques basées sur la protéine recombinante de protéine A / G assurent la compatibilité avec la plupart des anticorps primaires, que ce soit de souris ou de lapin
• Rapide : immunoprécipitation en à peine 30 minutes pour réduire le fond et améliorer la capture de complexes protéiques transitoires
• Propre : immobilisez votre anticorps pour éviter toute contamination de votre éluat
• Résistant : absence de lixiviation de la protéine A / G en présence de détergents, de tampons à faible pH ou de solvants de spectrométrie de masse courants
• Efficace : immunoprécipitation avec la moitié du volume recommandé de particules magnétiques par rapport à d’autres microbilles magnétiques
• Pratique : le kit de co-immunoprécipitation complet contient les microbilles magnétiques et tous les tampons essentiels pour mener à bien les expériences d’immunoprécipitation

Ce kit d’immunoprécipitation utilise des microbilles magnétiques de protéine A / G Thermo Scientific Pierce de haute qualité et des tampons optimisés et un protocole flexible pour réaliser une immunoprécipitation ou une co-immunoprécipitation à haut rendement avec des outils de séparation magnétique manuels ou automatisés. Le tampon de lavage/lyse optimisé optimise le rendement et la liaison efficace des interactions d’immunoprécipitation et anticorps-antigène. Le tampon d’élution à faible pH relativement doux dissocie le complexe immunitaire de liaison de la protéine A/G. Alternativement, le tampon d’échantillon avec marqueur de piste inclus fournit une élution rapide et dénaturante pour l’analyse directe SDS-PAGE des produits d’immunoprécipitation.

Comprend :
Microbilles magnétiques de protéine A / G Pierce, tampon de lyse / lavage, tampon d’élution, tampon de neutralisation et tampon de chargement d’échantillons

L’immunoprécipitation avec des particules magnétiques est réalisée de la même manière que l’IP avec de l’agarose en microbilles, à la différence que les séparations sont effectuées à l’aide d’un aimant plutôt que par centrifugation. L’anticorps spécifique est d’abord ajouté à l’échantillon pour former un complexe immunitaire qui est ensuite lié aux microbilles magnétiques. Le complexe est lavé pour éliminer les matériaux non liés et un tampon d’élution à faible pH dissocie le complexe immunitaire lié de la protéine A/G. Le tampon d’échantillon Lane Marker est fourni pour la dissociation à l’aide de conditions dénaturantes ou pour la préparation d’échantillons en aval pour l’analyse SDS-PAGE. Le kit comprend des microbilles magnétiques de protéine A / G Pierce Thermo Scientific pour l’isolation magnétique rapide et pratique des antigènes et des tampons optimisés pour un haut rendement. Les microbilles sont retirées de la solution manuellement à l’aide d’un support magnétique ou par automatisation avec un instrument tel que le Thermo Scientific KingFisher Flex.

Il est généralement admis que des temps d’incubation plus longs des échantillons d’anticorps (de 2 heures à une nuit) permettent généralement d’obtenir de meilleurs rendements dans les tests d’immunoprécipitation. On suppose que ce plus grand rendement est accompagné d’un fond accru. Nos chercheurs ont constaté que la liaison anticorps-échantillon pendant la nuit suivie de l’immunoprécipitation avec le kit IP/Co-IP magnétique classique Pierce accroît le rendement sans augmenter le fond. Nous recommandons donc aux chercheurs d’effectuer cette étape de liaison pendant au moins 1 h dans la mesure du possible.

Résumé du protocole :
• Incubez le lysat cellulaire avec l’anticorps d’IP pendant 1 à 2 heures à température ambiante ou pendant la nuit à 4°C.
• Liez le complexe antigène-anticorps aux microbilles magnétiques de la protéine A / G pendant 1 heure à température ambiante.
• Lavez les microbilles deux fois avec le tampon de lyse / lavage IP et une fois avec de l’eau purifiée.
• Éluez le complexe antigène / anticorps.

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