Les réactifs de marquage aminoxyTMTsixplex partagent une structure identique, mais contiennent différents nombres d’isotopes 13C et 15N dans le rapporteur de masse. Cette procédure de marquage optimisée peut être réalisée en 1 heure. Après le marquage, les échantillons sont trempés et nettoyés à l’aide de l’extraction en phase solide HILIC avant l’analyse par spectrométrie de masse. Les six composés de l’ensemble de réactifs aminoxyTMTsixplex™ ont la même masse (c.-à-d. isobarique) et la même structure chimique (groupe aminoxy réactif carbonyle, bras espaceur et rapporteur de masse). Cependant, la distribution spécifique des isotopes 13C et 15N de chaque côté du site de fragmentation HCD ou ETD MS/MS dans chaque réactif entraîne une masse rapporteur unique (126-131 Da) dans la région à faible masse. Cet ensemble d’ions rapporteurs est utilisé pour mesurer l’abondance relative des molécules marquées dans un échantillon MS combiné (multiplexé) représentant six conditions de traitement différentes. Pour les applications MS en glycobiologie, les réactifs permettent le profilage quantitatif des isoformes de glycanes et la découverte de biomarqueurs de glycanes ; ils permettent une meilleure ionisation des glycanes marqués pour une sensibilité accrue et une meilleure rétention des glycanes marqués par la chromatographie liquide en phase inversée (RPLC). Les réactifs aminoxyTMT peuvent être utilisés pour quantifier une large gamme de molécules biologiquement importantes, y compris les hydrates de carbone, les stéroïdes ou les protéines oxydées.

Caractéristiques :
• Quantitatif : permet la l’analyse quantitative relative des glycanes ou d’autres biomolécules contenant du carbonyle à partir de plusieurs échantillons dérivés de cellules, tissus ou liquides biologiques
• Stable : la liaison à l’oxime stable et les produits formés par la réaction de marquage sont stables et ne nécessitent pas d’étape de réduction supplémentaire
• Efficace : marquage efficace à plus de 90 % en une heure
• Sensible : 20 fois le signal au bruit par rapport à l’analyse à la MS glycane native non marquée
• Multiplex : capable d’identifier et de caractériser jusqu’à six échantillons simultanément
• Optimisé : procédure et réactifs optimisés pour une excellente efficacité de marquage et une récupération des glycanes

Comprend :
• Les kits de réactifs de marquage contiennent suffisamment de marqueurs aminoxyTMT pour cinq expériences sixplex.

Matériel nécessaire :
• PNGase F (ou PNGase A) glycosidase et colonnes HLB Waters Oasis™

Applications :
• Multiplex jusqu’à 6 échantillons différents simultanément dans une seule expérience
• Analyse quantitative relative des glycanes
• Étude de la diversité structurelle de la glycosylation des protéines
• Étude de la glycosylation dans la signalisation cellulaire et la régulation
• Étude de la progression du cancer, découverte et analyse de produits biothérapeutiques

Les glycanes natifs sont difficiles à étudier par spectrométrie de masse en raison de leur faible efficacité d’ionisation. L’analyse quantitative des glycanes est particulièrement difficile en raison de l’absence de normes pour tous les glycanes d’origine naturelle et des difficultés reproductibles quantifiant plusieurs échantillons. Le groupe aminoxy a une meilleure réactivité avec les carbonyles et une meilleure stabilité du produit marqué par rapport aux hydrazides. Le marquage avec les réactifs aminoxyTMT améliore l’ionisation des glycanes, améliorant ainsi la sensibilité, et permet une quantification relative des glycanes pour un maximum de six échantillons simultanément.

Ces produits font l’objet d’une licence de marquage à usage limité.