L’amplification du signal de tyramide SuperBoost™ est la méthode la plus sensible pour la détection de cibles peu abondantes dans l’immunocytochimie fluorescente multiplexable (ICC), l’immunohistochimie (IHC ) et l’hybridation in situ (ISH). Les kits SuperBoost associent la luminosité des colorants AlexaFluor™ à l’amplification de signal supérieure d’une réaction de marquage par tyramide à médiation poly-HRP pour produire une sensibilité 10 à 200 fois supérieure aux méthodes standard. La sensibilité du kit SuperBoost est également 2 à 10 fois supérieure à celle des techniques d’amplification de signe de Tyramide standard telles que TSA™. Pour des recherches hors normes, les kits SuperBoost permettent d’affiner vos résultats pour une visibilité claire dans les domaines critiques que les méthodes d’imagerie standard ne révèlent pas.

Les kits SuperBoost sont simples à utiliser et facilement adaptés aux protocoles expérimentaux ICC, IHC ou FISH standard, en utilisant n’importe quel type de cellule ou de tissu. Les cellules marquées à l’aide d’un kit SuperBoost peuvent être imagées à l’aide de n’importe quel type de microscope produisant des images multiplex haute résolution. Ce kit particulier comprend du tyramide AlexaFluor 555 (555/565 ex/em), détecté à l’aide d’un cube de filtre standard Orange/RFP/TRITC. Ce kit présente également un anticorps secondaire IgG de chèvre anti-souris conjugué au poly-HRP.

Caractéristiques des kits SuperBoost :
• Sensibilité supérieure pour la détection de cibles de faible niveau ou difficiles à détecter par imagerie de fluorescence
• Protocole simple et détection à l’aide de filtres standard
• Convient aux images multiplex haute résolution—co-étiquetées avec DAPI, anticorps secondaires et autres kits SuperBoost
• Nécessite 10 à 100 fois moins d’anticorps primaires que les expériences standard ICC/IHC/ISH

Les kits SuperBoost sont basés sur le système d’amplification du signal tyramide qui utilise l’activité catalytique de la peroxydase de raifort (HRP) pour générer un marquage haute densité d’une protéine cible ou d’une séquence d’acide nucléique in situ. Une expérience ICC/IHC/ISH typique utilisant un kit SuperBoost nécessite 10 à 100 fois moins d’anticorps primaires que les expériences ICC/IHC/ISH standard. Les kits SuperBoost offrent une intensité de signal spécifique supérieure à celle du fond, de sorte que le protocole est facilement optimisé pour détecter un signal spécifique dans les échantillons où une autofluorescence endogène élevée est observée.

Avantages des kits SuperBoost

Amélioration du signal à l’aide des tyramides Alexa Fluor : Les kits SuperBoost utilisent les tyramides Alexa Fluor, qui réagissent avec HRP, pour déposer du colorant Alexa Fluor lumineux et photostable sur les protéines environnantes et d’autres molécules similaires. Les kits SuperBoost sont les seuls kits qui associent la luminosité des colorants Alexa Fluor à l’amélioration de l’amplification du signal de tyramide pour produire un signal de meilleure qualité.

Amélioration du poly-HRP : Contrairement à la TSA, les kits SuperBoost font appel à des anticorps secondaires marqués au poly-HRP. Dans de tels systèmes, plusieurs enzymes HRP sont conjuguées à des polymères courts, ce qui améliore grandement le signal par rapport aux systèmes de détection des HRP habituels. La poly-HRP est structurée de manière à ce que les anticorps pénètrent les cellules ou les tissus de manière aussi efficace que les anticorps secondaires marqués à la HRP. Le rapport molaire enzyme/anticorps présente une valeur moyenne de “ 4 ”.

Solution d’arrêt de réaction : Comme tout système d’étiquetage enzymatique, il est possible de surdévelopper le signal. Les kits SuperBoost incluent une solution d’arrêt HRP pour arrêter la réaction HRP. La solution d’arrêt HRP peut être utilisée pour obtenir un signal maximum, sans augmentation du signal de fond. Les images produites avec des temps de réaction HRP optimisés sont aussi nettes que les images produites avec les méthodes ICC/IHC/ISH standard, mais avec une sensibilité 10 à 200 fois supérieure.

Réduction du bruit de fond : Les kits SuperBoost incluent des bloqueurs pour l’élimination ou la réduction de la peroxydase endogène et des bruits de fond fluorescents. Ces bloqueurs permettent de s’assurer que seuls les signaux spécifiques sont améliorés tout en conservant les signaux non spécifiques / d’arrière-plan en vérification.