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Cells-to-CT 套組
作為
- 極為輕鬆快速 - 使用 96 個樣本進行 qRT-PCR 通常僅需 <10 分鐘
- 無冗長的 RNA 純化 - 無管柱、加熱或離心
- 卓越成效 - 專為一致的精確性、再現性和靈敏度所設計，適用於 1–100,000 顆細胞
- 經驗證的套組工作流程 - 預先最佳化的完整試劑組，取出即可立即高效率工作
- Extraordinary ease and speed—96 samples for qRT-PCR in typically <10 min
- No tedious RNA purification—no columns, heating, or centrifugation
- Superior performance—designed for consistent accuracy, reproducibility, and sensitivity with 1–100,000 cells
- Validated kit workflows—complete sets of reagents preoptimized to work efficiently right out of the box
1 步驟或 2 步驟 qRT-PCR？
適合選擇 1 步驟套組的情況：
- 有許多樣本但僅有一或數個目標
- 不存放 cDNA
- 使用液體處理設備
適合選擇 2 步驟套組的情況：
- 需要更高的靈敏度來進行稀有轉錄
- 有可能封存 cDNA
- 有多個目標要使用 cDNA 定量
- 使用液體處理設備
TaqMan 或 SYBR Green 化學？
TaqMan 偵測通常提供更短流程、更高特異性與靈敏度，以及多目標處理的能力。採用 SYBR Green 染料的方法在可使用引子的範圍方面經常被視為更具彈性，且通常花費更低。
Cells-to-CT 套組選擇指南
| 快速高級 Cells-to-CT 套組 | Cells-to-CT 套組 | |||
|---|---|---|---|---|
| 一個完整工作流程 | 溶解 → RT → qPCR | |||
| Cells-to-CT 溶解、去氧核醣核酸酶和終止液 | 是 | |||
| 偵測化學 | SYBR Green 形式* | TaqMan 形式* | SYBR Green 形式* | TaqMan 形式* |
| 取得結果的時間 | 95 分鐘 | 80 分鐘 | 120 分鐘 | |
| 工作範圍 | 10-100,000 顆細胞 | 10-100,000 顆細胞 | ||
| 特異性 | 中† | 高 | 中† | 高 |
| 靈敏度 (成功進行 qPCR 反應之樣本的最高百分比) | 13.5% 溶解產物 | 20% 溶解產物 | 20% 溶解產物 | 20% 溶解產物 |
| 再現性 | 中† | 高 | 中† | 高 |
| 多目標處理 | ||||
| 預先設計的檢定 | ||||
| 通常需要使用者設計，實驗最佳化 | ||||
| 基因表現 | 中階定量 | 高階定量 | 中階定量 | 高階定量 |
| 應用 |
|
|
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| 偵測 |
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立即訂購 |
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* 採用 SYBR Green 的偵測使用 SYBR Green 染料 (結合雙股 DNA 的染料) 來偵測在 PCR 期間累積的 PCR 產物。
** 採用 TaqMan 的偵測使用具目標基因特異性的螢光探針來偵測 PCR 期間累積的目標。
† 採用 SYBR Green 的檢定需要設計並確認引子以確保特異性。特異性和再現性會因模板品質和引子設計及最佳化而有不同。
| 立即訂購 | 立即訂購 | |
| Cells-to-CT 1-步驟 TaqMan 套組 | Cells-to-CT 1-步驟 Power SYBR Green 套組 | |
| 1-步驟 qPCR 樣本製備 | 1-步驟 qPCR 樣本製備 | |
| 偵測化學 | TaqMan | SYBR Green |
| 特異性 | 高 | 中* |
| 溶解步驟中的細胞數 | 10-100,000 顆細胞 | 10-100,000 顆細胞 |
| 偵測靈敏度 | 1–10 個拷貝 | 可變* |
| 再現性 | 高 | 中* |
| 需 RNA 純化 | 否 | 否 |
| 8 個樣本的 (qRT-PCR) 樣本製備時間 | 7 分鐘 | 7 分鐘 |
| 總時間 (從細胞溶解到 qRT-PCR 結果) | 35 分鐘 | 1 小時 23 分鐘 |
| 多目標處理 | ||
| cDNA 封存 | ||
| 包括 RT 酵素和預混劑 | ||
| 包括預放大試劑 | ||
| 適用於自動化 | ||
| 靈活性 | 中 | 中 |
| 立即訂購 | |
| Single Cell-to-CT qRT-PCR 套組 | |
| Single Cells-to-CT 套組 | |
| 偵測化學 | TaqMan |
| 特異性 | 高 |
| 溶解步驟中的細胞數 | 1-10 顆細胞 |
| 偵測靈敏度 | 1–10 個拷貝 |
| 再現性 | 高 |
| 需 RNA 純化 | 否 |
| 8 個樣本的 (qRT-PCR) 樣本製備時間 | 7 分鐘 |
| 總時間 (從細胞溶解到 qRT-PCR 結果) | 3 小時 |
| 多目標處理 | |
| cDNA 封存 | |
| 包括 RT 酵素和預混劑 | |
| 包括預放大試劑 | |
| 適用於自動化 | |
| 靈活性 | 高 |
* 取決於模板品質和引子/設計最佳化。
| 快速高級 Cells-to-CT 套組 | Cells-to-CT 套組 | |||
|---|---|---|---|---|
| 一個完整工作流程 | 溶解 → RT → qPCR | |||
| Cells-to-CT 溶解、去氧核醣核酸酶和終止液 | 是 | |||
| 偵測化學 | SYBR Green 形式* | TaqMan 形式* | SYBR Green 形式* | TaqMan 形式* |
| 取得結果的時間 | 95 分鐘 | 80 分鐘 | 120 分鐘 | |
| 工作範圍 | 10-100,000 顆細胞 | 10-100,000 顆細胞 | ||
| 特異性 | 中† | 高 | 中† | 高 |
| 靈敏度 (成功進行 qPCR 反應之樣本的最高百分比) | 13.5% 溶解產物 | 20% 溶解產物 | 20% 溶解產物 | 20% 溶解產物 |
| 再現性 | 中† | 高 | 中† | 高 |
| 多目標處理 | ||||
| 預先設計的檢定 | ||||
| 通常需要使用者設計，實驗最佳化 | ||||
| 基因表現 | 中階定量 | 高階定量 | 中階定量 | 高階定量 |
| 應用 |
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| 偵測 |
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* 採用 SYBR Green 的偵測使用 SYBR Green 染料 (結合雙股 DNA 的染料) 來偵測在 PCR 期間累積的 PCR 產物。
** 採用 TaqMan 的偵測使用具目標基因特異性的螢光探針來偵測 PCR 期間累積的目標。
† 採用 SYBR Green 的檢定需要設計並確認引子以確保特異性。特異性和再現性會因模板品質和引子設計及最佳化而有不同。
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| Cells-to-CT 1-步驟 TaqMan 套組 | Cells-to-CT 1-步驟 Power SYBR Green 套組 | |
| 1-步驟 qPCR 樣本製備 | 1-步驟 qPCR 樣本製備 | |
| 偵測化學 | TaqMan | SYBR Green |
| 特異性 | 高 | 中* |
| 溶解步驟中的細胞數 | 10-100,000 顆細胞 | 10-100,000 顆細胞 |
| 偵測靈敏度 | 1–10 個拷貝 | 可變* |
| 再現性 | 高 | 中* |
| 需 RNA 純化 | 否 | 否 |
| 8 個樣本的 (qRT-PCR) 樣本製備時間 | 7 分鐘 | 7 分鐘 |
| 總時間 (從細胞溶解到 qRT-PCR 結果) | 35 分鐘 | 1 小時 23 分鐘 |
| 多目標處理 | ||
| cDNA 封存 | ||
| 包括 RT 酵素和預混劑 | ||
| 包括預放大試劑 | ||
| 適用於自動化 | ||
| 靈活性 | 中 | 中 |
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| Single Cell-to-CT qRT-PCR 套組 | |
| Single Cells-to-CT 套組 | |
| 偵測化學 | TaqMan |
| 特異性 | 高 |
| 溶解步驟中的細胞數 | 1-10 顆細胞 |
| 偵測靈敏度 | 1–10 個拷貝 |
| 再現性 | 高 |
| 需 RNA 純化 | 否 |
| 8 個樣本的 (qRT-PCR) 樣本製備時間 | 7 分鐘 |
| 總時間 (從細胞溶解到 qRT-PCR 結果) | 3 小時 |
| 多目標處理 | |
| cDNA 封存 | |
| 包括 RT 酵素和預混劑 | |
| 包括預放大試劑 | |
| 適用於自動化 | |
| 靈活性 | 高 |
* 取決於模板品質和引子/設計最佳化。
新 Invitrogen 快速高級 Cells-to-CT 套組能讓研究人員完全略過 RNA 純化，可透過即時 RT-PCR (RT-qPCR) 直接處理培養細胞樣本來測量相對基因表現。在彈性方面，Cells-to-CT 套組能以 TaqMan 和 SYBR Green 形式供貨。這些套組提供直接處理培養細胞進行 RT-qPCR 分析的完整工作流程，無須 RNA 純化。這些套組提供獨特的方法，可在溶解培養細胞的同時去除基因體 DNA (gDNA) 並保留 RNA 完整性，而套組內容包括適用於 cDNA 合成的反轉錄 (RT) 試劑，以及適用於即時 PCR 分析的 TaqMan 或 SYBR Green 預混劑。
提供兩種格式以增加彈性
新 TaqMan 快速高級 Cells-to-CT 套組採用改良版反轉錄酵素，能更靈敏地偵測豐富或稀有轉錄子。這讓直接處理培養細胞執行表現分析而不需純化 RNA 成為可能。此套組有助於節省時間並提供簡易工作流程，不僅適用於少數樣本，而且也能輕鬆地併入自動化的高處理量應用。
TaqMan 快速高級 Cells-to-CT 套組提供：
- 與原始 TaqMan 基因表現 Cells-to-CT 套組相同的專利溶解溶液和終止液
- 偵測目標的卓越特異性
- 極為輕鬆快速 - 使用 96 個樣本進行 RT-qPCR 通常僅需 <10 分鐘
- 無冗長的 RNA 純化 - 無管柱、加熱、離心或樣本轉移
- 卓越成效 - 專為一致的精確性、再現性和靈敏度所設計，適用於 10–100,000 顆細胞
- 經驗證的優質套組工作流程 - 預先最佳化的完整試劑組，取出即可立即高效率工作
- 可使用超過 200 萬種預先設計的檢定來偵測幾乎任何基因產物
- 適用於 RefSeq 資料庫中近乎所有人類、小鼠和大鼠基因的平價檢定
- 可用於 28 種物種和部分病原體
新 SYBR Green 快速高級 Cells-to-CT 套組是快速、輕鬆且穩健的方法，可直接處理培養細胞來取得即時 PCR 結果。這個經實證的細胞溶解與 RNA 穩定技術完全排除了勞神耗時的 RNA 純化程序。本套組採用 Applied Biosystems AmpliTaq Gold DNA Polymerase, LD (Low DNA)，能以標準即時 PCR 提供最高階的特異性。
SYBR Green 快速高級 Cells-to-CT 套組提供：
- 與原始 TaqMan 基因表現 Cells-to-CT 套組相同的專利溶解溶液和終止液
- 偵測目標的高度特異性
- 極為輕鬆快速 - 使用 96 個樣本進行 RT-qPCR 通常僅需 <10 分鐘
- 無冗長的 RNA 純化 - 無管柱、加熱或離心
- 卓越成效 - 專為一致的精確性、再現性和靈敏度所設計，適用於 10–100,000 顆細胞
- 高生產力、經驗證的優質套組工作流程 - 預先最佳化的完整試劑組，取出即可立即高效率工作
以更少時間取得更高靈敏度
Cells-to-CT 終止液可讓更多樣本進入下游 RT 和 qPCR 反應，大大地提高偵測稀有目標的靈敏度。TaqMan 與 SYBR Green 快速高級 Cells-to-CT 套組皆使用終止液，能以非常快速的工作流程提供絕佳靈敏度。這些套組的速度是大多數最高處理量 RNA 純化套組的約 48 倍。快速高級 Cells-to-CT 套組一次可處理 96 或 384 孔；96 或 384 孔盤的實驗工作流程僅需約 10 分鐘的時間。其他供應商產品的工作流程會用到低 pH 值和稀釋，這會限制可用於下游步驟的細胞溶解產物數量。
基因表現實驗工作流程：比較
圖 1.工作流程各步驟的溶解產物或 RT 反應體積。我們目前 Cells-to-CT 產品組合的主要競爭對手是立即可用的套組。
基因表現實驗工作流程
圖 2.快速高級 Cells-to-CT 套組的程序為 2 步驟程序，包含細胞溶解後的反轉錄和 qPCR。1 步驟反應為在單一孔槽中進行 RT 和 qPCR。在 qPCR 步驟中，TaqMan 檢定使用專為各目標設計的客製化引子和探針組合。這些檢定比使用一般 qPCR 引子的 SYBR Green 檢定更加靈敏且更具特異性。
Cells-to-CT 套組提供直接處理培養細胞進行即時 qRT-PCR 分析的完整工作流程，無須 RNA 純化。這些套組提供獨特的方法，可在溶解培養細胞的同時去除基因體 DNA (gDNA) 並保留 RNA 完整性，而套組內容包括適用於 cDNA 合成的反轉錄 (RT) 試劑，以及適用於即時 PCR 分析的探針型 (TaqMan 探針) 或染料型 (SYBR Green 染料) 預混劑。
1 步驟和 2 步驟套組的不同之處在於，1 步驟套組將反轉錄和即時 PCR 結合成單一步驟，顯著降低了吸量管反覆沖吸次數和實驗操作時間。
無論您是使用孔盤或試管，Cells-to-CT 套組均使用簡易的 7–8 分鐘樣本製備程序，如下所述 (圖 2)。本溶解技術是針對每樣本 10–100,000 顆培養細胞而設計。細胞以 PBS 清洗，接著在室溫溶解 5 分鐘；去氧核醣核酸酶處理可同時執行。使用終止液於室溫培養 2 分鐘以終止溶解。此時溶解產物已可在您的即時 PCR 儀器上進行分析，或可將它們存放於 –20°C 最多 5 個月。2 步驟套組工作流程繼續進行反轉錄以合成 cDNA，此後 cDNA 樣本可進行封存或直接使用即時 qPCR 進行分析。
由於樣本可直接在培養孔 (96 或 384 孔) 中處理，樣本處理步驟以及樣本流失或轉移失誤的可能性均盡可能減少，有助於快速高處理量處理。不同於傳統多步驟 RNA 分離流程，不需加熱、清洗或離心步驟。本套組大大簡化了費力的 30–60 分鐘程序，將其降低成 7–8 分鐘的反應時間，讓從樣本到 qRT-PCR 答案的完整細胞培養處理僅需 35 分鐘的時間 (例如 Cells-to-CT 1 步驟 TaqMan 套組)。
相較於傳統 RNA 純化，快速高級 Cells-to-CT 2 步驟套組更快速便利且不會降低靈敏度。由於工作流程以溶解產物為基礎，因此 Cells-to-CT 套組不會流失 RNA。在傳統 RNA 純化中，往往會因對濾器或磁珠溶析不完全而流失小量 RNA。因此，使用 Cells-to-CT 套組處理樣本時，偵測低輸入細胞樣本 (10–1,000 個) 中稀有 RNA 的能力更好，優於使用 RNA 純化工作流程從相同樣本取得的結果。這點再加上終止液的優勢，使得 Cells-to-CT 工作流程在偵測豐富與低拷貝轉錄子方面更靈敏，優於競爭對手套組。
圖 3.相較於其他套組的靈敏度。遵循各套組的實驗流程溶解 104 顆細胞。將最大量的溶解產物加入各套組的 RT (Cells-to-CT 和快速高級 Cells-to-CT 套組為 45%；其他供應商為 10%)。接著使用各套組的 qPCR 預混劑，將 25% 的 RT 加入適用於磷酸二酯酶之 TaqMan 檢定的 qPCR 反應。快速高級 Cells-to-CT 套組相較於原始 Cells-to-CT 套組有平均 0.5 Ct 差異的更好表現，而相較於其他供應商的套組則有 3.6 Ct 差異的更好表現 (為其他供應商靈敏度的 11 倍)。
圖 4.相較於其他套組的靈敏度。遵循各套組的實驗流程溶解 104 顆細胞。將最大量的溶解產物加入各套組的 RT (原始 Cells-to-CT 和快速高級 Cells-to-CT 套組為 45%；其他供應商套組為 10%)。接著使用各套組的 qPCR 預混劑，將 25% 的 RT 加入適用於磷酸二酯酶之 TaqMan 檢定的 qPCR 反應。結論：快速高級 Cells-to-CT 套組相較於原始 Cells-to-CT 套組有平均 0.7 Ct 差異的更好表現，而相較於其他供應商的套組則有 4.7 Ct 差異的更好表現。這表示快速高級套組的靈敏度是其他供應商套組的 14 倍。
圖 5.偵測比較。遵循各套組的實驗流程溶解 104 顆 HepG2 細胞。將最大量的溶解產物加入各套組的 RT (Cells-to-CT 和快速高級 Cells-to-CT 套組為 45%；其他供應商為 10%)。接著將 25% 的 RT 加入其他供應商套組的 qPCR 反應；將 30% 的 RT 加入快速高級 Cells-to-CT 套組的 qPCR 反應；將 45% 的 RT 加入 Power SYBR 套組。檢定 10 種不同的基因。大多數基因都並未在此細胞株中被偵測到。在偵測到的基因中，大多數基因在使用快速高級 Cells-to-CT 套組時的 Ct 值會低於其他套組。
快速高級 Cells-to-CT 套組包含一個可在 10 分鐘內完成 96 或 384 個樣本的樣本製備步驟。磁珠套組等高處理量 RNA 分離方法可處理 384 個樣本，但實驗操作所需時間長達 3 小時*。考量到一般藥物標靶驗證篩檢都會處理多個 96 或 384 孔盤，我們比較了製備 1,536 個樣本所需的時間 (即 4 x 384 孔盤或 16 X 96 孔盤)。
- Cells-to-CT 約需 40 分鐘到 1 小時的時間來處理 1,536 個樣本 (即 4 盤 384 孔形式)。
- 磁珠式分離流程約需 48 小時的時間來處理 1,536 個樣本 (即 16 盤 96 孔形式，每盤需 3 小時的時間)。
- Cells-to-CT 套組可達 48 倍快。
* 根據 MagMAX mirVana 總 RNA 分離套組的實驗操作所需時間
Cells-to-CT 套組的所有內容均已針對一致性和可靠成效最佳化。這大大地減少了組合個別樣本製備和即時 RT-PCR 預混劑時的推測。
為了提高品質保證的可信度，Cells-to-CT 1 步驟 TaqMan 套組已透過 TaqMan 基因表現檢定驗證，而 Cells-to-CT 1 步驟 Power SYBR Green 套組已透過一組常見目標基因的引子驗證。兩者的成效均相當於透過純化 RNA 取得的成效 (圖 6)。
我們比較了 TaqMan 基因表現 Cells-to-CT 套組與其它市售溶解套組及純化 RNA 的成效。我們檢驗了每次溶解反應中 100–100,000 顆細胞的輸入。TaqMan Cells-to-CT 套組實驗流程的靈敏度相當於透過純化 RNA 取得的靈敏度，且優於其他供應商的靈敏度 (圖 7)。
圖 6.使用 Cells-to-CT 套組的靈敏度與對有限目標序列的偵測。(A) 使用溶解產物與純化 RNA 之基因表現檢定的靈敏度比較。使用 Cells-to-CT 1 步驟 TaqMan 套組以三重複處理希拉細胞 (10–100,000 顆)，或使用 RNA 離心管柱方法純化 RNA。針對 Cells-to-CT 控制套組的 XENO 和 ACTB，使用 7900HT 即時 PCR 系統的即時 RT-PCR 來分析每組樣本。(B) 有限目標序列的偵測。將增量的 NIH3T3 細胞 (小鼠) 加入 10,000 顆希拉細胞。使用 TaqMan 基因表現 Cells-to-CT 套組 (2 步驟程序) 或以 RNA 離心管柱方法純化之試劑，以三重複處理細胞。所有樣本均針對小鼠特異性 (B2M) 和人類特異性 (TKT) 基因，使用 7900HT 快速即時 PCR 系統以三重複反應進行反轉錄。
圖 7.採用以 Cells-to-CT 套組產生之溶解產物的 TaqMan 基因表現檢定所取得的良好靈敏度。使用傳統 RNA 純化、TaqMan 基因表現 Cells-to-CT 套組，或來自供應商 Q 和 S 的其他溶解產物方法來製備希拉細胞 (100–100,000 顆)。使用各套組所建議之最大樣本輸入進行反轉錄反應，並使用 PPIA TaqMan 基因表現檢定以三重複執行即時 PCR。
為協助您體驗橫跨多項應用之最佳結果的能力，我們也提供即時 PCR 儀器應用解決方案來完整您的實驗工作流程。即時 PCR 用於靈敏的特異性偵測和目標核酸定量。我們已開發出強大的檢定設計演算法、最佳化的預混劑、直覺式資料分析軟體，以及彈性的儀器應用，協助您在豐富多樣的各式應用中駕馭 qPCR 的能力。為您採用 qPCR 之研究探索解決方案。
Cells-to-CT 套組評論、影片和網路研討會
 | The TaqMan Gene Expression Cells-to-CT Kit has performed consistently. The performance is increased as compared to RNA purification, RT steps, and then qRT-PCR. There is less handling, less chance at mistakes. Because of this time savings and increase in sensitivity, I’ve incorporated this protocol into the Human Embryonic Stem Cell Training Course at the Stem Cell Research Center at Rutgers University. |  |
—Director, Stem Cell Core Facility | ||
| Gene expression quantification on cultured cells using the reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) typically involves an RNA purification step that limits sample processing throughput and precludes parallel analysis of large numbers of samples. An approach in which cDNA synthesis is carried out on crude cell lysates instead of on purified RNA samples can offer a fast and straightforward alternative. Here, we evaluate such an approach, benchmarking the Ambion Cells-to-CT kit with the classic workflow of RNA purification and cDNA synthesis, and demonstrate its good accuracy and superior sensitivity. | |
Cells-to-CT Kits: A fast way to kill your cells for gene expression analysis
This ASCB presentation shows you how Invitrogen Cells-to-CT Kits allow you to measure relative gene expression by real-time RT-PCR without having to purify RNA prior to amplification.
How to analyze gene expression from cultured cells
Learn how to prepare RNA for gene expression analysis from cultured cells in 7 minutes.
Less Time to Real-Time PCR with Invitrogen Cells-to-CT kits
You get real-time PCR results in less time with the Invitrogen Cells-to-CT Kits. It is fast, easy and robust. Fewer handling steps ensure shorter protocol time, increased consistency, minimal sample loss and a reduced risk for contamination.
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