Das BaculoDirect™ Baculovirus-Expressionsystem ist ein leistungsstarkes und vielseitiges eukaryotisches System für die hochstufige Proteinexpression in Insektenzellen. Die Kombination von Gateway™-Technologie mit Baculovirus-Expression macht das BaculoDirect-System zur schnellsten und einfachsten Methode für die Produktion von rekombinantem Baculovirus.

Funktionsweise
BaculoDirect™ Lineare DNA (das Baculovirus-Genom) ist so konstruiert, dass sie attR-Stellen für eine schnelle und effiziente Rekombination mit einem Gateway Entry-Klon enthält. Das Gen von Interesse wird mit einer einfachen einstündigen LR-Reaktion vom Entry-Klon in BaculoDirect Linear DNA rekombiniert (Abb. 1). Das resultierende Reaktionsgemisch enthält rekombinantes Baculovirus, das das Gen von Interesse trägt, und wird direkt zur Transfektion von Insektenzellen verwendet Eliminiert die Notwendigkeit, Bakterien zu transformieren und große Bacmid- oder Co-Transfektion von Transfervektor und linearer Baculovirus-DNA in Insektenzellen zu isolieren, um die Bearbeitungszeit zu verkürzen Dadurch verkürzt sich die Einarbeitungszeit erheblich. Gereinigtes Baculovirus kann in weniger als einer Woche isoliert werden.

Gateway lineare DNA
BaculoDirect Lineare DNA ist für schnelles Klonen mit einem Gateway-Entry-Klon und anschließender Expression in Sf9 oder Sf21 Insektenzellen konzipiert. Die lineare DNA umfasst:

• Starker Polyhedrin-Promotor für hohe Expression
• R-Stellen für eine effiziente Rekombination mit jedem attL-flankierten Gateway-Eingangsvektor
• TK-Gen für eine Negativselektion mit Ganciclovir
• C-terminal V5-His-Tag (BaculoDirect™ C-Term Expressionskit) oder N-terminal V5-His-Tag (BaculoDirect™ N-Term Expressionskit) Für den Nachweis mit Anti-V5-Antikörpern und die Aufreinigung mit Nickel-Chelator-Harz
• TEV-Protease-Spaltstelle zur Entfernung des V5-His-Tags nach der Aufreinigung (BaculoDirect N-Term Expressionskit)
• LacZ-Gen, um sicherzustellen, dass ein reiner Baculovirus-Bestand erzeugt wird, der nach der rekombinanten LR-Reaktion durch Ihr interessierendes Gen ersetzt wird

Zusätzliche Materialien erforderlich, separat erhältlich: Gateway-Entry-Klon.

Eine Auswahlhilfe für die Auswahl des am besten geeigneten Gateway-Eingabevektors für Ihre Anwendung finden Sie unter www.thermofisher.com/Gateway.