Pierce™ DAB-Substrat-Kit

Das Thermo Scientific Pierce DAB Substrat-Kit ermöglicht den chromogenen Nachweis der Aktivität von Meerrettich-Peroxidase (HRP) auf Grundlage der Wirkung von 3,3'-Diaminobenzidin (DAB) in Western Blots und Gewebefärbeverfahren.

DAB (3,3'-Diaminobenzidin-Tetrahydrochlorid; Molekulargewicht = 214,1) reagiert mit HRP bei Vorhandensein von Peroxid und bildet ein unlösliches braun gefärbtes Reaktionsprodukt an Stellen, an denen mit Peroxidase konjugierte Antikörper an Proben gebunden sind. Das braune Präzipitat ist in Alkohol und anderen organischen Lösungsmitteln unlöslich. Damit wird es zu einem hervorragenden Substrat für Färbungen in der Immunhistochemie, bei denen die Verwendung von herkömmlichen Gegenfärbe- und Eindeckmitteln erforderlich ist. Das Pierce DAB Substrat-Kit enthält eine 10x-Lösung aus DAB und Substratpuffer mit stabilem Peroxid. Kristallines DAB (Pulver) ist ebenfalls erhältlich.

Merkmale des DAB Substrats:

• HRP-Substrat – zum Nachweis der Aktivität von Meerrettich-Peroxidase auf festen Medien, einschließlich Nitrozellulose und PVDF-Membranen und fixierten Gewebeproben
• Chromogen – keine spezielle Ausrüstung für die Visualisierung erforderlich; die DAB-Reaktion erzeugt braune Banden bzw. Flecken an den Reaktionsstellen von HRP-konjugierten Antikörpern bzw. Sonden
• Verpackungsoptionen –Auswahl zwischen Pulver für die kundenspezifische Formulierung mit Puffer und Peroxid oder einem Komplettpaket mit vorformulierten Lösungen zum sofortigen Einsatz

Merkmale des Pierce DAB Substrat-Kits:

• Anwenderfreundlich—Verdünnung der 10x-Stammlösung in eine 1x-Lösung mit dem mitgelieferten stabilen Peroxidpuffer
• Sicherer—Vorformulierte DAB-Lösung minimiert Sicherheitsbedenken bezüglich dieser Chemikalie
• Vollständig—Enthält praktische Lösung eines stabilen Wasserstoffperoxidpuffers (Art.Nr. 34062)
• Stabil—Bei 4 °C mindestens ein Jahr stabil; Lagerung im Tiefkühlgerät nicht erforderlich

DAB wurde in verschiedenen Anwendungen eingesetzt, einschließlich Western Blotting, Immunhistochemie und Elektronenmikroskopie. Es gibt zahlreiche Berichte über Verstärkungsmethoden der DAB-Färbung, einschließlich verschiedener Pufferbedingungen, Zugabe von Metallionen und Verfahren zur Nachbearbeitung (Ref. 1 bis 7; siehe auch das Pierce Metall-verstärkte DAB Substrat-Kit, Art.Nr. 34065). Ein Nachteil von DAB im Vergleich zu anderen Substraten ist die Notwendigkeit, die Arbeitslösung sofort zu verwenden, da der Reaktionsprozess mit Zugabe von Wasserstoffperoxid sofort startet. Dies führt zu einer erhöhten Hintergrundfärbung des Substrats. Allerdings verblassen die bei der DAB-Reaktion entstehenden braunen Banden nicht so schnell wie die Farbprodukte anderer fällender HRP-Substrate.

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