NE-PER™ Extraktionsreagenzien für nukleares und zytoplasmatisches Protein

Das Thermo Scientific NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit sorgt in weniger als 2 Stunden für die wirksame Zelllyse und separate Extraktion der zytoplasmatischen und nukleären Proteinfraktionen.

Merkmale des NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit:

• Schnell: Nukleäre und zytoplasmatische Fraktionen löslicher Proteine liegen in weniger als 2 Stunden vor
• Bewährt: Das NE-PER Reagent Kit wird in mehr als 950 verschiedenen Fachpublikationen erwähnt
• Vielfältig: Kernprotein aus kultivierten Zellen oder Geweben (nur für frische Proben bestimmt)
• Skalierbar: Zwei Kit-Größen für die Herstellung von Extrakten aus Zellen und Geweben
• Praktisch: Einfache Anweisungen, erfordern keine Ultrazentrifugation über Gradienten
• Kompatibel: Verwendung für nachgelagerte Assays, einschließlich Western Blotting, Gel-Shift-Assays, Proteinassays, Reportergen-Assays und Enzymaktivitäts-Assays

Das NE-PER Kit ist ein Verfahren zur Extraktion nukleärer Proteine, das eine einfache, schrittweise Lyse von Zellen und eine zentrifugale Isolierung von Kern- und Zytoplasma-Proteinfraktionen umfasst. Mikrozentrifuge (Tischgerät), Röhrchen und Pipetten sind die einzigen erforderlichen Hilfsmittel. NE-PER Reagenzien gestatten die effiziente Solubilisierung und Trennung zytoplasmatischer und nuklearer Proteine mit minimalen Kreuzkontaminationen und Interferenzen seitens genomischer DNA und mRNA. Nach der Entsalzung oder Verdünnung können die isolierten Proteine für Immunassays und Protein-Interaktionsexperimente verwendet werden, wie z. B. Mobilitäts-Shift-Assays (EMSA), Co-Immunpräzipitation (Co-IP) und Pulldown-Assays.

Es gibt eine Vielzahl von Methoden zur Isolierung von Zellkernen und zur Vorbereitung von Kernproteinextrakten. Die meisten dieser Methoden sind langwierige Prozesse, die mechanische Homogenisierung, Gefrier-/Auftauzyklen, ausgiebige Zentrifugierung oder Dialyse erfordern, und diese Schritte können die Integrität der Kernproteine beeinträchtigen. Das NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagent Kit ist ein Reagenz-basiertes Protokoll, das die schrittweise Zelllyse ermöglicht. Anschließend folgen die Trennung des Zytoplasmas vom intakten Zellkern und dann die Extraktion der Kernproteine, wobei genomischen DNA und mRNA entfernt werden. Dieser schonende Prozess erfordert weniger als 2 Stunden. Bei der Verwendung von Zellkulturen reicht eine Standard-Tischzentrifuge aus. Darüber hinaus können sowohl aktive Kernproteine als auch zytoplasmatische Proteine aus derselben Zellkultur- oder Gewebeprobe gewonnen werden.

Aus zwei Millionen Zellen ergibt das Kit typischerweise 200 bis 500 µg zytoplasmatisches Protein und 100 bis 200 µg nukleäres Protein (bei einer Konzentration von 1 mg/ml). Ein typischer Wert für die Kreuzkontamination zwischen zytosolischer und nukleärer Fraktion beträgt rund 10 %. Die Methode isoliert in erster Linie lösliche Proteine aus dem Zellkern und nicht so sehr in Chromatin gebundene Proteine bzw. integrale Membranproteine der Zellkernhülle. Die Proteinkonzentration der Kernextrakte kann auf einfache Weise beeinflusst werden: Dazu lässt sich das Volumen des bei der Nuklearextraktion eingesetzten Reagenzes (NER) ohne signifikante Verluste für die Wirksamkeit der Extraktion anpassen. Für den Erfolg vieler Genregulationsstudien spielt die spezifische Extraktion von Kernproteinen eine zentrale Rolle. Es gibt zwar zahlreiche Methoden der Kernisolierung und Extraktion von Kernproteinen, doch bei den meisten handelt es sich um langwierige Prozesse. Neben mechanischer Homogenisierung sind Gefrier-/Auftauzyklen sowie ausgiebige Zentrifugierung oder Dialyse erforderlich und diese Schritte können die Integrität der vieler fragiler Kernproteine beeinträchtigen. Das NE-PER Kit löst diese Probleme und bietet hochwertige, konzentrierte nukleäre Proteinextrakte für die Verwendung in EMSA und anderen Analyseverfahren.

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