Thermo Scientific Mikrokokken-Nuklease (MNase) eignet sich für die Entfernung von Nukleinsäuren aus Zelllysaten, für die Freisetzung von Chromatin-gebundenen Proteinen und für das Aufscheren von Chromatinen für die Weiterverwendung in Experimenten mit Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP)

Merkmale von Mikrokokken-Nuklease (MNase):

• Enzym verdaut Nukleinsäuren (DNA und RNA)
• Effektiv für doppelsträngige, einsträngige, kreisförmige und lineare Nukleinsäuren
• Aktiv in neutralen bis alkalischen Pufferbedingungen, die divalente Calciumionen
• enthalten Lieferung bei ≥100 Einheiten/µl in 10 mM Tris-HCl pH 7,5, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA, 50 % Glycerin

Diese mikrokokkale Nuklease ist eine stabile flüssige Form des Enzyms, das aus Staphylococcus aureus gewonnen wurde. Mikrokokken-Nuklease (MNase) entwickelt exo- und endo-5'-Phosphodiesterase Aktivitäten gegen DNA und RNA. Dieses Enzym verdaut Doppel- und Einzelstrang- sowie zirkuläre und lineare Nukleinsäuren. Die höchste Aktivität wird gegen Einzelstrang-Nukleinsäuren-Substrate mit Präferenzen für AT- oder AU-reiche Regionen entfaltet. Die enzymatische Aktivität ist bei pH-Werten von 7 bis 10 zu beobachten, und der Verdau von DNA- und RNA-Substraten ist strikt von Kalzium abhängig. Micrococcal Nuclease eignet sich für die Entfernung von Nukleinsäuren aus Zelllysaten, die Freisetzung von chromatingebundenen Proteinen und das Scheren von Chromatin für die Verwendung in ChIP-Experimenten (Chromatin-Immunpräzipitation).

Eigenschaften von Micrococcal Nuclease (MNase):
•Das Produkt ist bei -20 °C flüssig. Beim Einsatz Enzym auf Eis legen.
• Mikrokokken-Nuklease kann nur bei Vorhandensein von Ca++ Aktivität entwickeln. Vermeiden Sie Reaktionspuffer mit Kalzium-Chelatoren, wie EGTA.
• Das Enzym ist bei pH-Werten 7 bis 10 mit einer Salzkonzentration von 100 mM aktiv. Bei 37 °C entwickelt das Enzym optimale Aktivität; es ist jedoch auch bei Raumtemperatur aktiv. Monovalente Metallionen, wie Na+ und K+, verringern die Aktivität. Egta oder das Erhitzen auf 65°C für 10 Minuten deaktiviert das Enzym.

Allgemeines Protokoll zur Verwendung von Micrococcal Nuclease (MNase):
• Verdünnen Sie die Probe in 50 mM Tris-HCl mit pH 8,0 und 5 mM CaCl₂
• Wenn die Probe nur Nukleotide enthält (d. h. kein Protein), fügen Sie BSA mit einer Endkonzentration von 0,1 mg/ml hinzu.
• Fügen Sie nun die Mikrokokken-Nuklease hinzu und inkubieren Sie die Reaktion bei 37 °C, bis die Nukleotide degradiert sind.
• Optional: Stoppen Sie die Reaktion, indem Sie EGTA mit pH 8,0 zu einer Endkonzentration von 20 mM hinzufügen.

Spezifikationen für Mikrokokken-Nuklease (Art.-Nr. 88216):
• Aussehen: Klare farblose Flüssigkeit, frei von unlöslichem Material.
• Einheiten: ≥100 Einheiten/µl
• Zusätzliche Informationen: 1 Einheit ist definiert als die Enzymmenge, die benötigt wird, um die Absorption von hochpolymerer DNA bei 260 nm und 25 °C um Inkremente von 0,001/min/ml zu steigern.

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