Pierce™ Kinase Enrichment Kit with ATP Probe

Dieses Thermo Scientific Pierce Kinase Anreicherungskit verwendet eine ActivX™ ATP-Sonde, um das aktive Zentrum von ATPasen, einschließlich Chaperonen und metabolischen Enzymen, kovalent zu markieren und so deren selektive Anreicherung mit dem Desthiobiotin-Tag zu ermöglichen.

ActivX ATP-Sonden verfügen über ein aminreaktives Nukleotidanalogon und einen Desthiobiotin-Tag (Biotinanalogon), der die selektive Markierung von Lysinen im aktiven Zentrum der Kinase und die anschließende Anreicherung und Rückgewinnung von markiertem Protein erleichtert. Diese Merkmale ermöglichen die Identifizierung und das Profiling von Zielenzymklassen in mehreren Proben oder die Beurteilung der Spezifität und Affinität von Enzyminhibitoren.

Merkmale des Pierce Kinase Anreicherungskits:

• Spezifisch – Markieren Sie nur die konservierten Aktivzentrum-Lysine von Nukleotid-Bindungsproteinen
• Flexibel – Für die In-vitro-Markierung von ATPasen, die aus Zellen oder Geweben gewonnen wurden
• Kompatibel – Verwendung bei Arbeitsabläufen mit Western Blot oder Massenspektrometrie (MS)

Anwendungen:
• Dosisabhängiges Profiling der Bindungsaffinitäten kleiner Moleküle und der Hemmung am aktiven Zentrum
• Identifizierung Dutzender bis Hunderter von Inhibitorzielen und Off-Targets in Geweben, Zellen und subzellulären Proteomen
• Anreicherung von Enzymen auf Basis ihrer Funktion

Thermo Scientific ActivX Desthiobiotin-ATP ist ein Nukleotidderivat, das das aktive Zentrum von Enzymen an konservierten Lysin-Resten in der Nukleotid-Bindungsstelle kovalent modifiziert. Die Struktur dieser Sonden besteht aus einem modifizierten Biotin (Desthiobiotin), das über eine labile Acyl-Phosphat-Bindung an das Nukleotid gebunden ist. Desthiobiotin ist ein Biotin-Analogon, das weniger fest an Biotin-Bindungsproteine bindet, was zu einer Bindung führt, die sich durch Biotin-Verdrängung, niedrigen pH-Wert oder Wärmedenaturierung leicht umkehren lässt.

Desthiobiotin-ATP-Sonden können zur selektiven Anreicherung, Identifizierung und zum Profiling von Enzymzielklassen oder zur Beurteilung der Spezifität von Enzymhemmern verwendet werden. Da viele ATPasen und andere Nukleotid-Bindungsproteine Nukleotide oder Inhibitoren auch im enzymatisch inaktiven Zustand binden, ist mit Desthiobiotin-Sonden das Profiling inaktiver und aktiver Enzyme in einer komplexen Probe möglich. Die Vorinkubation von Proben mit niedermolekularen Inhibitoren, die um das aktive Zentrum konkurrieren, ermöglicht die Bestimmung der Bindungsaffinität von Inhibitoren. Aktivzentrum-Nukleotidsonden können auch zur Identifizierung von Inhibitor-Off-Targets verwendet werden.

Für diese Produkte gilt eine Lizenz mit eingeschränkter Nutzung.

Zugehörige Produkte
ActivX™ Desthiobiotin-ATP-Sonde
Pierce™ Kinase Anreicherungskit mit ADP-Sonde Probe
ActivX™ Desthiobiotin-ADP-Sonde