Thermo Scientific Pierce 1,8K MWCO (Molecular Weight Cut Off)-Polyacrylamid-Entsalzungssäulen sind gebrauchsfertige Einweg-Gelfiltrationssäulen zur Trennung von Proteinen und anderen Makromolekülen aus Puffersalzen und Reagenzien mit geringem Molekulargewicht.

Pierce 1,8K MWCO-Polyacrylamid-Entsalzungssäulen sind mit porösen Polyacrylamid-Beads vorgepackt und ermöglichen den Pufferaustausch und die Entsalzung von Proteinen und anderen makromolekularen Proben auf Molecular Weight Cut Off (MWCO)-Basis von 1800. Anders als Medien für Größenausschluss unterliegt Polyacrylamidharz keiner enzymatischen Degradation und dient nicht als Nährstoff für mikrobielles Wachstum. Das Harz ist sehr hydrophil, wodurch unerwünschte Bindungsinteraktionen zwischen Harz und Probenmolekülen minimiert werden. Eine Kontamination mit Zucker mit niedrigem Molekulargewicht (die mit vernetztem Dextran-Harz auftreten kann) stellt bei der Verwendung von Polyacrylamidharz kein Problem dar. Oxidationsmittel können entfernt werden, ohne den Träger zu zerstören. Dieses Harz ist anfällig für Hydrolyse von Amidgruppen unter extremen pH-Bedingungen. Daher wird ein pH-Betriebswert von 2 bis 10 bei Raumtemperatur empfohlen. Das Polyacrylamidharz kann auch bei einem pH-Wert von 5,5 bis 6,5 für 30 Minuten bei 120 °C autoklaviert werden.

Diese Säulen verwenden ein Harz, dessen Beads im feuchten Zustand einen Durchmesser von 45 bis 90 µm haben. Und sie eignen sich hervorragend für die Trennung von Peptiden und kleinen Makromolekülen (mit einer Größe über 1,8 kDa) von Puffersalzen und anderen Verbindungen (kleiner als 500 MW).

Merkmale von Polyacrylamid-Harz:
• Stabil in Wasser, Salzlösungen, organischen Lösungsmitteln und alkalischen oder sauren Bedingungen
• Ausgezeichnete Fließeigenschaften
• Hitzebeständig

Anwendungen:
• Entfernen von Salzen aus Proteinlösungen
• Entfernen von Phenol aus Nukleinsäurezubereitungen
• Abscheiden überschüssiger Crosslinker aus Konjugatzubereitungen
• Entfernen von überschüssigen Derivatmitteln aus modifizierten Proteinen
• Entfernen von nicht an Reaktionen beteiligten Farbstoffen aus fluoreszierenden Antikörpern
• Entfernung von freier Radiomarkierung aus markierten Proteinen
• Austausch eines Puffers gegen einen anderen

Schwerkraftfiltration von Harz umfasst das chromatographische Abscheiden von Molekülen verschiedener Größe nach ihren relativen Penetrationsfähigkeiten in eine geeignete stationäre Phase. Eine chromatographische Matrix besteht im Allgemeinen aus sehr kleinen, ungeladenen porösen Partikeln in einer wässrigen Lösung und wird in eine Säule verpackt und für die Abscheidung verwendet. Je nach Porengröße des in die Säule gepackten Mittels können verschiedene Trennungsgrade erzielt werden. Das Mittel kann so ausgewählt werden, dass Proteine oder große Moleküle vollständig ausgeschlossen werden, während kleine gelöste Substanzen noch erfasst werden. Große Moleküle werden nicht von den internen Poren des Harzes aufgenommen und treten zuerst aus der Säule aus. Die kleineren Moleküle können die Poren durchdringen. Anschließend können sie mit geringerer Geschwindigkeit durch die Säule gelangen. Diese kleineren Moleküle werden anschließend mit zusätzlichem Puffervolumen durch die Säule gespült.

Entsalzung und Pufferaustausch sind zwei der am weitesten verbreiteten Anwendungen der Harzfiltrationschromatographie.

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