Das Thermo Scientific Pierce Anti-DYKDDDDK-Affinitätsharz bietet eine schnelle und bequeme Methode zur Aufreinigung und Immunpräzipitation (IP) von DYKDDDDK-markierten Proteinen, die in In-vitro-Proteinexpressionssystemen, Bakterien, Hefen und Säugetierzellen exprimiert wurden. Die Aminosäuresequenz DYKDDDDK, allgemein bekannt als „FLAG“, wird von einem hochaffinen, monoklonalen Rattenantikörper (Klon L5) erkannt, der kovalent an UltraLink Biosupport gebunden ist. UltraLink Biosupport ist ein starres, hydrophiles, stark vernetztes, copolymeres und poröses Harz mit hoher Kopplungskapazität. Aufgrund seiner Porosität, Steifigkeit und Haltbarkeit eignet sich das Harz für Schnelldurchflussverfahren großer Probenvolumina mit mittlerem Druck.

Für die Proteinaufreinigung oder IP wird Harz zu einer Probe hinzugefügt, die DYKDDDDK-markierte Proteine mit dem Tag entweder am N- oder C-Terminus enthält. Nach Erfassung der DYKDDDDK-markierten Proteinen können unspezifisch gebundene Proteine durch eine Wäsche entfernt werden, bevor gebundene Zielproteine mit Elutionspuffer dissoziiert werden. Das Pierce Anti-DYKDDDDK-Affinitätsharz wird für die Verwendung in Spin-Aufreinigungssäulen oder Kassetten für FPLC-Instrumente empfohlen.

Merkmale:
• Spezifisch—einzigartige Basen-Beads und hoch spezifische Antikörper minimieren die Off-Target-Bindung (geringe nicht spezifische Bindung)
• Hohe Reinheit—das optimierte Bindungs-Wäsche-Eluations-Protokoll sorgt für höchste Reinheit
• Hohe Ausbeute—hohe Ausbeute durch die spezielle Antikörper-Konjugationsmethode
• Schnell—das gesamte Aufreinigungsprotokoll benötigt normalerweise weniger als 40 Minuten
• Wirtschaftlich—das Aufreinigungsprotokoll ermöglicht eine mehrfache Wiederverwendung
• Vielseitig—geeignet für Spin-, Schwerkraft- oder FPLC-basierte Aufreinigungs- und Anreicherungsmethoden
• Skalierbar—erhältlich in 1, 5 und 50 ml-Packungen mit abgesetztem Harz für kleinere Immunpräzipitationen oder größere Aufreinigungsaufgaben

Merkmale des Pierce Anti-DYKDDDDK-Affinitätsharzes:

Zusammensetzung: anti-DYKDDDDK-Antikörper, kovalent an UltraLink Biosupport gebunden, ein stark vernetzter steifer Träger
Partikelgröße: 50–80 µ
mpH-Stabilität: 1–13
Empfohlene lineare Geschwindigkeit: < 150 cm/h
Betriebstemperatur: 2–30 °C; nicht einfrieren
Partikelkonzentration:50 % Suspension in Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung, 0,02 % Natriumazid, pH 7,5
Bindungskapazität: ≥ 3,0 mg DYKDDDDK-tGFP-His-Protein (∼32 kDa)/ml abgesetztes Harz