Das Click-iT™ RNA Alexa Fluor™ 488 Bildgebungs-Kit ermöglicht den Nachweis globaler RNA-Transkription zeitlich und räumlich in Zellen und Geweben (PNAS (2008) 105:15779-84).
Die Fähigkeit, neu synthetisierte RNA oder Veränderungen der RNA-Konzentrationen aufgrund von Krankheiten, Umweltschäden oder Arzneimittelbehandlungen nachzuweisen, ist ein wichtiger Aspekt der toxikologischen Analyse. Mit einem Alkin-modifizierten Nukleosid, 5-Ethinyluridin (EU), und einer leistungsstarken Click-Chemie kann neu synthetisierte RNA ohne die Verwendung von Radioaktivität oder Antikörpern mit einem einfachen, zweistufigen Verfahren nachgewiesen werden. In Schritt 1 wird das alkinhaltige Nukleosid Zellen oder Tieren zugeführt und aktiv in die naszierende RNA eingearbeitet. Die geringe Größe des Tags ermöglicht die effiziente Einbindung des modifizierten Nukleosids in RNA, nicht aber in DNA. Die Detektion nutzt die chemoselektive Ligation oder “ Klickreaktion” zwischen einem Azid und einem Alkin, bei der die modifizierte RNA mit einem entsprechenden azidhaltigen Farbstoff nachgewiesen wird. Das Click-iT™ Detektionsmolekül kann mit seinem sehr kleinen Platzbedarf problemlos in komplexe Proben eindringen und ermöglicht Multiplex-Analysen mit anderen Sonden, einschließlich Antikörpern zum Nachweis RNA-interaktiver Proteine für tiefere biologische Erkenntnisse.