Thermo Scientific Maxima H Minus Reverse Transkriptase (RT) wurde durch In-vitro-Evolution von M-MuLV RT entwickelt. Das Enzym besitzt eine RNA-abhängige und DNA-abhängige Polymerase-Aktivität, aufgrund einer Mutation in der RNase H-Domäne von M-MuLV RT jedoch keine RNase H-Aktivität. Das genetisch veränderte Enzym zeichnet sich im Vergleich zur Wildtyp M-MuLV RT durch eine wesentlich höhere Thermostabilität, 50 Mal höhere Prozessivität, Robustheit und verbesserte Syntheserate aus.

Die eliminierte RNase H-Aktivität ermöglicht es dem Enzym, sehr lange RNA-Transkripte bis zu 20 kb zu produzieren. Aufgrund seiner hohen Thermostabilität behält das Enzym während der gesamten Reverse-Transkriptionsreaktion seine volle Aktivität bei und erzeugt hohe Ausbeuten an cDNA. Die Reaktionstemperatur kann zur effizienten Transkription von RNA-Bereichen mit einer hohen Sekundärstruktur oder zur Verbesserung der Spezifizität von genspezifischen Primern bis auf 65 °C erhöht werden. Die extrem hohe Prozessivität des Maxima H Minus-Enzyms führt zu einer erhöhten Resistenz gegen häufige Reaktionshemmer wie Guanidin, Formamid und Ethanol.

Besonderheiten

• Thermostabil – 90 % aktiv nach 60-minütiger Inkubation bei 50 °C in einem Reaktionsgemisch.
• Aktiv bis zu 65 °C
• Hohe Ausbeute an cDNA mit voller Länge bis zu 20 kb
• Hochempfindlich – reproduzierbare cDNA-Synthese über einen großen Bereich von Gesamt-RNA (1 pg bis 5 µg)
• Effizient – vollständige cDNA-Synthese in 15 bis 30 Minuten
• Erhöhte Resistenz gegen häufige Reaktionsinhibitoren
• Enthält modifizierte Nukleotide

Anwendungen

• Erststrang-cDNA-Synthese für RT-PCR und Echtzeit-RT-qPCR.
• Reverse Transkription bei erhöhten Temperaturen, um die Auswirkungen der Sekundärstruktur zu verringern.
• Synthese von cDNA für Klonierung und Expression.
• Erzeugung markierter cDNA-Proben für Microarrays.
• Analyse von RNA durch Primer-Extension.

Hinweis
• Auch erhältlich: : Maxima H Minus First Strand cDNA-Synthese-Kit.