L’EDC Thermo Scientific Pierce est un agent de réticulation de longueur zéro réactif à la carboxyle et à l’amine. L’EDC réagit d’abord à un groupe carboxyle et forme un intermédiaire O-acylisourea réactif aux amines qui réagit rapidement à un groupe amino pour former une liaison amide avec la libération d’un sous-produit d’isourée. L’intermédiaire est instable dans les solutions aqueuses et les procédures de conjugaison en deux étapes reposent donc sur le N-hydroxysuccinimide (NHS) dans un souci de stabilisation. L’absence de réaction à une amine entraîne l’hydrolyse de l’intermédiaire, la régénération du carboxyle et la libération d’une urée N-substituée. Une réaction latérale est la formation d’un N-acylurea, qui est généralement limité aux carboxyles situés dans des régions hydrophobes de protéines.

Les produits Thermo Scientific au format No-Weigh sont des réactifs spéciaux fournis dans un format pré-aliquoté. L’emballage pré-pesé évite la perte de réactivité et de contamination des réactifs au fil du temps en évitant l’ouverture et la fermeture répétitives du flacon. Ce format permet l’utilisation d’un flacon de réactif frais à chaque fois, éliminant ainsi les tracas liés à la pesée de petites quantités de réactifs et réduisant les préoccupations quant à la stabilité des réactifs.

Caractéristiques de l’EDC :

• Groupe de réactifs : Carbodiimide
• Cible de réaction : active les groupes carboxyles à conjuguer aux groupes aminés (amines primaires)
• Plusieurs stratégies de conjugaison : faites réagir l’EDC seul avec des groupes cibles ou incluez le NHS ou le Sulfo-NHS pour augmenter l’efficacité de la réaction ou stabiliser l’intermédiaire actif pour réaction ultérieure avec des amines
• Liaison neutre : forme des liaisons amides neutres entre les carboxyles et les amines
• Réactif soluble dans l’eau : ajoutez directement aux réactions dans les tampons physiologiques aqueux
• Sous-produits de réaction soluble : facilement supprimés par lavage avec de l’eau ou de l’acide dilué
• Réactif cristallin d’une grande pureté : utilisez-le pour créer des dérivés activés de haute qualité

Propriétés de l’EDC
• Formule moléculaire : C₈H₁₇N₃·HCl
• Poids moléculaire : 191,7
• Longueur du bras espaceur : 0 Å
• Numéro CAS : 25952-53-8
• Groupes réactifs : carbodiimide
• Réactivité : forme un intermédiaire actif avec des groupes carboxyles au pH 4,7–6,0 (optimum), puis l’intermédiaire réagit aux amines primaires

1-éthyl-3-[3-diméthylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride (EDC ou EDAC) est un agent de réticulation de longueur zéro utilisé pour coupler les groupes carboxyles aux amines primaires. Cet agent de réticulation a été utilisé dans diverses applications, comme la formation de liaisons d’amides lors de la synthèse de peptides, la fixation d’haptènes à des protéines porteuses pour former des immunogènes, le marquage des acides nucléiques par le biais de groupes de 5’ phosphates et la création des esters de NHS réactifs aux amines de biomolécules. L’EDC réagit avec un carboxyle pour former un intermédiaire d’O-acylisourée réactif aux amines. Si cet intermédiaire ne rencontre pas d’amine, il s’hydrolise et régénère le groupe carboxyle. En présence de N-hydroxysulfosuccinimide (sulfo-NHS), l’EDC peut être utilisé pour convertir des groupes carboxyles en esters de sulfo-NHS réactifs aux amines. Ceci est réalisé en mélangeant l’EDC à une molécule contenant le carboxyle et en ajoutant le Sulfo-NHS.

Applications :
• Conjuguer des groupes carboxyles et amino parmi des peptides et des protéines
• Coupler des haptènes à des protéines porteuses immunogènes (p ex., fixation d’un peptide à de la KLH))
• Immobiliser des antigènes peptidiques à des anticorps purifiés par affinité
• Créer des composés de marquage réactifs aux amines et activés par NHS
• Réticuler des protéines à des microbilles ou à des surfaces revêtues de carboxyles
• Activer des nanoparticules avec des esters de sulfo-NHS réactifs aux amines
• Marquer de l’ADN par le biais de groupes de 5’ phosphates (voir le conseil technique n° 30)

Références produit :
Guide d’applications des agents de réticulation : recherchez les références à ce produit dans la documentation récente