Pour les échantillons de protéines et d’autres échantillons biologiques, tels que les acides nucléiques avec un seuil de rétention des molécules de 50 000, les concentrateurs de protéines en PES Thermo Scientific Pierce offrent une concentration protéique rapide, une excellente récupération des échantillons et une compatibilité avec les instruments. Ces dispositifs centrifuges sont dotés d’une membrane en polyéthersulfone (PES) à haut débit pour la concentration, le dessalage et l’échange de tampons d’échantillons biologiques. Ce produit a un seuil de poids moléculaire de 50 000 et peut être utilisé pour le traitement de volumes d’échantillons de 0,5 à 100 ml.

Les caractéristiques des concentrateurs de protéines en PES à seuil de rétention des molécules de 50 000 incluent :
• Concentration protéique rapide—la concentration des échantillons de 10 à 30 fois peut être obtenue en 15 minutes ou moins
• Excellente récupération protéique—la récupération protéique type est de >90 % (lorsque la masse des protéines de l’échantillon est au moins deux fois supérieure à celle du seuil de rétention des molécules)
• Compatibilité des instruments—une microcentrifugeuse standard avec rotors pivotants (sauf 88504) ou à angle fixe peut être utilisée ; recueillez et récupérez l’échantillon sans centrifuger
• Polyvalent—une manière simple pour réaliser la concentration d’échantillons, la diafiltration ou l’échange de tampon d’échantillons biologiques

Pour une identification facile, la valeur du seuil de rétention des molécules est gravée sur le côté de chaque dispositif. Pour faciliter l’ajout et la récupération d’échantillons, une fenêtre transparente avec graduations se trouve sur le côté de chaque dispositif permettant la détermination visuelle du volume rétentat. La conception verticale de la membrane permet des débits élevés, une faible liaison non spécifique et une agrégation protéique négligeable sur la membrane, et elle offre des résultats fiables et cohérents pour le traitement de volumes d’échantillon compris entre 0,5 et 100 ml. La récupération protéique type est de 90 %, lorsque la masse des protéines de l’échantillon est au moins deux fois supérieure à celle du seuil de rétention des molécules de l’instrument utilisé. Par exemple, lorsque vous utilisez des échantillons d’IgG (poids moléculaire ∼150 000), utilisez les concentrateurs à seuil de rétention des molécules de 5 000, 10 000, 30 000 ou 50 000. Une concentration de l’échantillon de 10 à 30 fois peut être obtenue en 15 minutes.

Applications des concentrateurs de protéines en PES
• Concentration protéique de milieux de culture tissulaire, d’antisérum ou de préparations d’anticorps monoclonaux
• Concentration des pics protéiques après chromatographie sur perméation au gel
• Enlèvement du marquage non incorporé après réactions de modification protéique
• Concentration et dessalage/échange de tampon après l’élution de protéines à partir de colonnes d’échange d’ions, d’interaction hydrophobe (HIC), de chélate métallique ou de chromatographie d’affinité
• Séparation des molécules de différentes dimensions

Les concentrateurs de protéines en PES Pierce contiennent une membrane évaluée pour le maintien des molécules présentant un poids moléculaire au moins deux fois supérieur à la valeur du seuil de rétention des molécules de la membrane en PES à l’intérieur du dispositif. Une récupération réduite peut avoir lieu lors de l’utilisation d’un concentrateur possédant des molécules plus petites que la masse recommandée. La récupération des protéines varie en fonction de la protéine spécifique de l’échantillon et de sa concentration de départ.

Le volume d’arrêt pour les concentrateurs de 0,5 ml, 2 à 6 ml, 5 à 20 ml et 20 et 100 ml est d’environ 15 µl, 30 µl, 50 µl et 350 µl, respectivement.

Pour obtenir une récupération de >90 % des protéines avec les concentrateurs de 0,5 ml, la concentration minimale de l’échantillon de protéines doit être de 0,05 mg/ml. Pour tous les autres concentrateurs, la concentration minimale de l’échantillon de protéines doit être de 0,1 mg/ml.

Centrifugeuses et vitesses optimales
Les concentrateurs de 0,5 ml peuvent être utilisés efficacement à une force centrifuge maximale de 15 000 × g en utilisant uniquement une centrifugeuse à angle fixe.

Pour les concentrateurs de 2 à 6 ml, on peut utiliser des modèles de centrifugeuse à nacelle mobile ou à angle fixe. Les centrifugeuses à nacelle mobile capables de générer 2 000 à 4 000 × g et une force centrifuge maximale de 4 000 × g sont recommandées. Pour les centrifugeuses à angle fixe, il est recommandé d’utiliser des modèles capables de générer 5 000 à 10 000 × g et une force centrifuge maximale de 8 000 × g.

Pour les concentrateurs de volume de 5 à 20 ml, on peut utiliser des modèles de centrifugeuse à nacelle mobile ou à angle fixe. Les centrifugeuses à nacelle mobile capables de générer 2 000 à 5 000 × g et une force centrifuge maximale de 4 000 × g sont recommandées. Pour les centrifugeuses à angle fixe, les modèles capables de générer 5 000 à 8 000 × g et une force centrifuge maximale de 6 000 × g sont recommandés.

Pour les concentrateurs de 20 à 100 ml, seules les centrifugeuses à nacelle mobile capables de générer 1 000 à 2 000 × g sont recommandées. Utilisez une force centrifuge maximale de 2 000 × g. Ces concentrateurs ne sont pas recommandés pour une utilisation dans les rotors à angle fixe.

La force centrifuge, la température, le volume d’échantillon, la concentration et la viscosité affectent tous le débit de filtration. Le temps de centrifugation doit donc être optimisé pour chaque application.