Les acides aminés lourds et légers Thermo Scientific sont utilisés pour analyser spécifiquement l’expression des protéines par spectrométrie de masse à l’aide d’un marquage isotopique stable avec des acides aminés dans les kits de quantification de culture cellulaire (SILAC). Il s’agit d’une préparation lyophilisée de L-lysine-2HCl (¹³C₆), suffisante pour 1 expérience SILAC.

Caractéristiques générales des acides aminés lourds et légers en rapport avec le marquage SILAC :

• Efficace — l’intégration de marqueurs efficaces à 100 % à des protéines de cellules vivantes
• Flexible — différents isotopes d’acides aminés lourds et/ou légers pour l’arginine, la lysine, la leucine et la proline permettent la quantification de peptides dérivés de protéases de qualité MS
• Capacités Multiplex — il existe plusieurs isotopes alternatifs de l’arginine et de la lysine qui permettent l’analyse de multiples conditions de traitement dans chaque expérience
• Suppléments de qualité élevée — acides aminés lourds avec >99 % de pureté isotopique

Le marquage isotopique des acides aminés dans les cultures cellulaires (méthode SILAC) est une méthode performante permettant d’identifier et de quantifier les changements différentiels relatifs dans les échantillons de protéines complexes. Cette approche implique l’intégration métabolique in vivo d’acides aminés lourds marqués ¹³C- ou ¹⁵N dans les protéines, suivie de la spectrométrie de masse (MS) pour l’identification, la caractérisation et la quantification accélérées et complètes des protéines.

Les acides aminés lourds et légers Thermo Scientific pour SILAC sont utilisés avec des milieux de culture cellulaire spécialisés déficients en acides aminés essentiels La L-lysine et la L-arginine lourdes et légères sont les acides aminés les plus courants utilisés pour l’analyse de SILAC des peptides tryptiques. Jusqu’à trois conditions expérimentales différentes peuvent être facilement analysées avec différents isotopes de lysine et d’arginine. Pour les expériences avec trois plex de lysine, 4,4,5,5-D₄ L-lysine et ¹³C₆ ¹⁵N₂ L-lysine sont utilisées pour générer des peptides avec des déplacements de masse de 4 et 8 Da, respectivement, par rapport aux peptides générés avec la lysine légère. Pour les expériences avec trois plex d’arginine, ¹³C₆ L-arginine et ¹³C₆ ¹⁵N₄ L-arginine sont utilisées pour générer des peptides avec des déplacements de masse de -6 et 10 Da, respectivement, par rapport aux peptides générés avec l’arginine légère. La L-leucine est un autre acide aminé couramment utilisé pour le marquage SILAC, car il s’agit de l’un des acides aminés les plus courants présents dans les séquences protéiques. La proline est un acide aminé non essentiel qui est parfois ajouté aux milieux SILAC pour empêcher la conversion métabolique de l’arginine lourde en proline lourde dans les lignées cellulaires de mammifères ayant une activité élevée de l’arginine déshydrogénase.

Produits associés
L-Arginine-HCl pour SILAC
L-Proline pour SILAC
L-Leucine pour SILAC
L-Lysine-2HCl pour SILAC