L’ADN ligase T4 Thermo Scientific catalyse la formation d’une liaison phosphodiester entre les terminaux de 5’-phosphate et de 3’-hydroxyle juxtaposés dans l’ADN ou l’ARN duplex. L’enzyme répare les cassures des souches premier brin d’ADN, d’ARN en duplex, ou d’ADN / ARN hybrides. Elle permet également de joindre les fragments d’ADN avec des terminaux cohésifs ou émoussés, mais n’a pas d’activité sur les acides nucléiques premier brin.

L’ADN ligase T4 nécessite de l’ATP comme cofacteur.

Points clés

• Active dans les enzymes de restriction Thermo Scientific, la PCR et les tampons de RT (lorsqu’ils sont supplémentés avec de l’ATP)
• Rapide : la ligature de l’extrémité collante est réalisée en 10 minutes à température ambiante
• Fournie avec une solution de PEG pour la ligature efficace de l’extrémité émoussée

Applications

• Clonage de fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction
• Clonage de produits de PCR
• Raccordement des liens d’oligonucléotides bicaténaires ou des adaptateurs à l’ADN
• Mutagénèse dirigée
• Polymorphisme de longueur des fragments amplifiés (AFLP)
• Détection d’ARN ligase (voir Référence 3)
• Réparation des cassures d’ADN, ARN duplex ou d’ADN / ARN hybrides
• Auto-circularisation de l’ADN linéaire.

Comprend

• L’ADN ligase T4
• Le tampon d’ADN ligase T4 10X
• Une solution contenant 50 % de PEG

Remarques

• La liaison de l’ADN ligase T4 à l’ADN peut entraîner un déplacement des bandes dans les gels d’agarose. Afin d’éviter cela, incubez les échantillons avec une solution de 6X colorants& de charge d’ADN et SDS à 70°C pour 5 min ou à 65°C pour 10 minutes et refroidissez-les sur de la glace avant l’électrophorèse.
• Le volume de mélange de réaction de ligature ne doit pas dépasser 10 % du volume de cellules compétentes utilisé pour le processus de transformation.
• Avant l’électro-transformation, retirer l’ADN ligase T4 du mélange de ligature à l’aide de colonnes de centrifugation ou par extraction de chloroforme. L’ADN extrait peut être ensuite précipité avec de l’éthanol.