Les kits de séquençage Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning offrent une stratégie de clonage en une seule étape, en 5 minutes et très efficace pour l’insertion directe de produits PCR à extrémités franches, amplifiés par polymérase de relecture dans un vecteur plasmidique à des fins de séquençage. Chaque kit utilise le vecteur TOPO™ pCR™4Blunt (voir figure) avec des sites d’amorce de séquençage spécifiquement conçus, qui permettent, pour chaque réaction, d’augmenter la séquence d’insert et de réduire celle du vecteur. Ces kits incluent tout ce dont vous avez besoin pour cloner et sélectionner les vecteurs recombinants contenant le fragment de PCR de votre choix.

Vecteur TOPO™ PCR™4Blunt—optimisé pour le séquençage
Nous avons éliminé la majeure partie du site de clonage multiple du vecteur TOPO™ pCR™4Blunt pour raccourcir la distance entre les sites d’amorce de séquençage et le site d’insertion à une valeur aussi faible que 33 bp. Résultat : les réactions de séquençage diminuent la séquence de vecteur et augmentent celle de l’insertion. Le vecteur TOPO™ pCR4Blunt comprend des sites pour 4 amorces de séquençage communes : M13 direct, M13 inverse, T7 et T3. Les kits incluent une aliquote de chaque.
Sélection et manipulation de clones TOPO™ pCR™4Blunt
Le vecteur TOPO™ pCR™4Blunt contient à la fois des marqueurs de résistance à l’ampicilline et à la kanamycine et une fusion de gènes LacZα-ccdB pour une sélection positive. Le site de clonage multiple minimisé du vecteur inclut toujours des sites EcoRI de flanquement pour l’excision simplifiée des produits de PCR clonés et un site Sse8387I unique pour la génération des suppressions imbriquées avant le séquençage. Les promoteurs T7 et T3 sont également présents pour la transcription in vitro.

Clonage simplifié basé sur TOPO™
Grâce à la technologie de clonage TOPO™, il n’est pas nécessaire d’utiliser des amorces pour PCR contenant des séquences spécifiques ou des procédures post-PCR, de préparer les vecteurs ni d’effectuer d’autres étapes de manipulation longues d’ADN. Il suffit d’ajouter votre réaction PCR directement dans le vecteur chargé en topoisomérase, d’incuber pendant 5 minutes et de la transformer les cellules compétentes E. coli fournies.

Clonage efficace
Avec jusqu’à 95 % de clones porteurs de l’insert désiré, vous n’avez plus besoin d’analyser autant de clones, ce qui vous permet de gagner du temps et de l’argent. Le vecteur TOPO™ pCR™4Blunt utilisé dans ce kit est livré sans saillies pour une ligature efficace des produits PCR créés par relecture, des polymérases thermostables qui laissent des produits PCR avec des extrémités franches.

La norme en matière de clonage
En matière de clonage, la technologie de clonage TOPO™ est un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Rapide, simple d’utilisation et efficace, le clonage TOPO™ a été appliqué à de nombreux vecteurs différents pour un large éventail d’applications.

Kit de clonage par PCR Zero Blunt™ TOPO™ pour séquençage—formats de kit
Le kit de clonage par PCR Zero Blunt™ TOPO™ pour séquençage peut être acheté avec une variété de cellules compétentes offrant différents avantages en fonction de vos besoins :

• Clonage général : Cellules TOP10 (No de catalogue K2875-J10, K2875-20, K2875-40)
• Clonage à haute efficacité : Cellules ™ TOP10 Electrocomp (No de catalogue K2880-20, K2880-40)
• Clonage général, résistance aux bactériophages T1 : DH5α-T1R (No de catalogue K2895-20)
• Croissance rapide : Mach1™-T1^R chimiquement compétente E. Coli (No de catalogue K2835-20)

Liens connexes

• Services de construction et de clonage de vecteurs personnalisés
• Guide de sélection de kit de purification d’ADN plasmidique
• Réactifs, instruments et fournitures pour PCR