Maxima™ H Minus cDNA Synthesis Master Mix
Thermo Scientific™

Maxima™ H Minus cDNA Synthesis Master Mix

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RéférenceComprendNbre de réactions
M1681Kit with dsDNase50 réactions
M1661Kit only50 réactions
M1662Kit only200 réactions
M1682Kit with dsDNase200 réactions
Référence M1681
Prix (EUR)
386,65
Online Exclusive
552,00
Économisez 165,35 (30%)
Each
Comprend:
Kit with dsDNase
Nbre de réactions:
50 réactions
Grand volume ou format personnalisé
Prix (EUR)
386,65
Online Exclusive
552,00
Économisez 165,35 (30%)
Each
Le mélange Thermo Scientific Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix fournit tous les composants de la réaction de synthèse d’ADNc dans un Master Mix en un tube pratique. Il est optimisé pour une synthèse d’ADNc très efficace pour les applications quantitatives de RT-PCR (RT-qPCR) en deux étapes.

Les caractéristiques comprennent :
• Le Master Mix en un tube permet de réduire les étapes de pipetage et d’améliorer la cohérence des résultats de RT-qPCR
• Amélioration de l’efficacité de la RT sur une large gamme de quantités d’ARN introduit et de cibles génétiques
• Haute thermostabilité pour permettre des réactions de RT à une plage de températures de 50 à 65°C

Le Master Mix contient la transcriptase inverse (RT) Maxima H Minus et l’inhibiteur d’ARNase RiboLock. La RT Maxima H Minus est une enzyme avancée dérivée de la RT M-MuLV par l’évolution in vitro. L’enzyme présente une thermostabilité élevée, une robustesse, une processivité, une augmentation du taux de synthèse d’ADNc et un manque d’activité de la RNase H. L’inhibiteur recombinant de la RNase RiboLock protège efficacement le modèle d’ARN contre la dégradation par les RNases A, B et C à des températures jusqu’à 55°C maximum. Le Master Mix contient un tampon de réaction, des dNTPs, l’oligo (dT)18 et des amorces hexamères aléatoires. Un tube séparé de mélange de contrôle sans RT est également fourni.

Le mélange Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix est capable de réaliser une synthèse reproductible d’ADNc à des températures élevées (50 à 65°C). La réaction de synthèse est généralement terminée entre 15 et 30 minutes.

Informations complémentaires sur les composants de la réaction
• Le mélange de contrôle sans RT contient tous les composants du mélange Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix, à l’exception de la RT. La présence d’un produit PCR dans la réaction de contrôle sans RT indique que la réaction est contaminée par de l’ADN. Afin d’améliorer davantage l’efficacité d’élimination de l’ADN génomique, l’incubation du modèle d’ARN avec la DNasedb (n° cat. EN0771) est fortement recommandée.
• De l’eau exempte de nucléase est fournie pour la préparation de la réaction et la dilution des échantillons d’ADN. L’absence d’exodésoxyribonucléases, de ribonucléases et de phosphatases a été confirmée par des tests de qualité appropriés.

Produits associés
Kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minu, avec DNasedb
Kit de synthèse d’ADNc premier brin Maxima H Minus
Transcriptase inverse Maxima H Minus
DNasedb
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Type de produit finalADNc premier brin
FormatMaster Mix de synthèse d’ADNc
ComprendKit with dsDNase
Nbre de réactions50 réactions
Température de réaction optimale50°C
QuantitéEach
Format de réactionComposants prémélangés
Type de réactifTranscription inverse
Transcriptase inverseMaxima H Minus
Activité de la ribonucléase HRéduction
Conditions d’expéditionGlace carbonique
Taille (produit final)Jusqu’à 20 kb
Matériau de départARN
TechniqueTranscription inverse
À utiliser avec (application)Synthèse d’ADNc, RT-PCR
GC-Rich PCR PerformanceÉlevé
Vitesse de réaction30 min
Unit SizeEach
Contenu et stockage

• Master Mix de synthèse d’ADNc Maxima H Minus (1 x 200 μl)
• Master Mix de contrôle “sans RT” de synthèse d’ADNc Maxima H Minus (1 x 200 μl)
• DNasedb (1 x 50 μl)
• Tampon de DNasedb 10X (1 x 100 μl)
• Eau sans nucléase (1 x 1,25 ml)

Conserver entre –30°C et –5°C.

Foire aux questions (FAQ)

Why is there no heat inactivation step for the dsDNase in the protocol for Maxima H Minus cDNA Synthesis Master Mix (Cat. No. M1681)?

The novel dsDNase enzyme degrades double-stranded genomic DNA. However, it has no effect on the single-stranded cDNA or the RNA-DNA hybrid. Therefore, the enzyme mix for reverse transcription can be added directly to the dsDNase treated RNA.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

What steps should I take while performing first strand cDNA synthesis using low purity template (e.g., inhibitors in RNA sample)?

Trace amounts of reagents used in RNA purification protocols may remain in solution and inhibit first-strand synthesis, e.g., SDS, EDTA, guanidine salts, phosphate, pyrophosphate, polyamines, spermidine. To remove trace contaminants, we recommend re-precipitating the RNA with ethanol and washing the pellet with 75% ethanol, or re-purifying the RNA.

For reverse transcription, how important is the quality of RNA template?

RNA purity and integrity are essential for synthesis and quantification of cDNA. Always assess the integrity of RNA prior to cDNA synthesis. Use freshly prepared RNA. Multiple freeze/thaw cycles of the RNA sample and synthesized cDNA is not recommended. Avoid RNase contamination and discard low quality RNA.

When should I choose regular RevertAid RT or Maxima RT vs. RevertAid H Minus RT or Maxima H Minus RT?

It is generally beneficial to minimize RNase H activity when aiming to produce long transcripts for cDNA cloning. RNase H degrades RNA from RNA-DNA duplexes, which can result in truncated cDNA during reverse transcription of long mRNA. We also recommended using RNase H Minus RTs for template-independent addition of C nucleotides. In contrast, reverse transcriptases with intrinsic RNase H activity are often favored in 1-step RT-qPCR applications.

What is the fidelity of RevertAid and Maxima reverse transcriptases?

The fidelity of RevertAid and Maxima reverse transcriptases is the same as that of wild-type M-MuLV RT, which is in the range of 1 error per 15,000-27,000 nucleotides synthesized.