Las contratinciones nucleares de DAPI Thermo Scientific Pierce contienen formas de alta pureza del colorante de diamidino-2-fenilindol para la tinción fluorescente de células fijas de núcleos y contenido de ADN para las técnicas de adquisición de imágenes celulares.

También disponible como una solución estable a temperatura ambiente, lista para su uso. Reactivo de célula fija NucBlue Ready Probes.
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DAPI (diamidino-2-fenilindol) es una sonda azul fluorescente que muestra una fluorescencia brillante tras unirse selectivamente al surco menor del ADN bicatenario. En este caso, la fluorescencia es aproximadamente 20 veces mayor que en estado no unido. Su capacidad de selección del ADN y gran permeabilidad celular permiten una tinción eficaz de los núcleos con poco fondo del citoplasma. DAPI es una contratinción nuclear clásica para microscopía inmunofluorescente, así como un importante componente para los métodos de detección de alto contenido que requieren cuantificación basada en células del contenido de ADN.

Características de la contratinción nuclear DAPI:

• Colorante DAPI: diamidino-2-fenilindol es una tinción azul fluorescente específica para ADN
• Cómodo: seleccione el polvo o la solución de colorante DAPI fácil de usar (1 mg/ml)
• Adquisición de imágenes celulares: el colorante penetra en las células y es eficaz para la tinción de células fijas y la cuantificación del contenido de ADN
• Contratinción: ideal para utilizar junto con la detección de elementos diana específicos mediante anticuerpos fluorescentes para microscopía de fluorescencia o detección de alto contenido (HCS)

Propiedades del colorante fluorescente DAPI:

• Nombres alternativos: Tinción DAPI, colorante DAPI, contratinción de contenido de ADN
• Nombre(s) químico(s): 4,6'-diamidino-2-fenilindol, dihidrocloruro; 4',6-diamidina-2-fenil indol; 2-(4-amidinofenil)-6-indolecarbamidina dihidrocloruro
• Fórmula molecular: C₁₆H₁₅N₅·2HCl
• Peso molecular: 350.25
• Longitud de onda de excitación: 341±3 nm (cercano a 360 nm cuando se une al ADN bicatenario [ADNdc])
• Longitud de onda de emisión: 452±3 nm (de 456 a 460 nm cuando se une al ADN bicatenario [ADNdc])
• Coeficiente de extinción: > 30.600/M cm a 347 nm en metanol
• CAS #: 28718-90-3
• Pureza: > 95 % (mayoría de lotes > 98 %) por cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) a 240 nm
• Solubilidad: > 1 mg/ml en agua; el compuesto es soluble en dimetilformamida (DMF), agua y varios tampones acuosos sin fosfato
• Grupos reactivos: Ninguno; se une al surco menor del ADN bicatenario

Como contratinción en la adquisición de imágenes fluorescentes, DAPI es compatible con anticuerpos y otras sondas etiquetadas con colorantes de fluoresceína y rodamina, así como con los flúores Thermo Scientific DyLight. DAPI tiene mayor fotoestabilidad que los tintes Hoechst, aunque Hoechst 33342 se puede utilizar para la adquisición de imágenes de células vivas, mientras que el uso de DAPI se reduce a las células fijas. DAPI se ofrece en forma de solución acuosa y sólida en polvo.

Aplicaciones de la tinción DAPI:

• Pruebas de ADN en solución (ref. 4)
• Diagnóstico de infecciones micoplasmáticas en cultivos celulares (ref. 5)
• Medición del contenido nuclear y clasificación de cromosomas en citometría de flujo (ref. 6)
• Evaluación de la apoptosis (ref. 7)
• Detección de ADN organular y núcleos en procedimientos inmunofluorescentes y de hibridación in situ (ref. 2, 8)
• Sustitución del bromuro de etidio para la tinción de ADN en geles de agarosa (ref. 5, 9)
• Contratinción de núcleos en métodos histoquímicos cuando se han utilizado anticuerpos rojo fluorescente para detectar elementos diana específicos (ref. 8)
• Los informes también indican que DAPI se une a los polifosfatos y a otros polianiones (ref. 10), al sulfato de dextrano (ref. 11) y el dodecilsulfato sódico (SDS) (ref. 12).

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