Pierce™ Sulfhydryl Addition Kit

Das Thermo Scientific Pierce Sulfhydryl-Additionskit enthält alle erforderlichen Komponenten, um freie Sulfhydrylgruppen in jedes primäre amine-haltige Molekül einzuführen, das modifizierte Molekül zu reinigen und die hinzugefügten Sulfhydrylgruppen zu quantifizieren. SATA ist ein kurzkettiges (2,8 Angström großes Distanzarm-) Reagenz für die kovalente Modifikation von primären Aminen und die Hinzufügung einer geschützten, aber exponierbaren Sulfhydrylgruppe, die heterobifunktionale Crosslinking-Strategien ermöglicht.

Merkmale von SATA:

• Fügt ein geschütztes Sulfhydryl hinzu, deren Schutz durch Hydroxylamin entfernt werden kann
• Erlaubt langfristige Lagerung des Sulfhydryl-modifizierten Moleküls
• Formt spaltbare Disulfid-Bindungen mit anderen Sulfhydryl-haltigen Molekülen
• Reagiert mit primären Aminen (z. B. Lysin-Rückstandsproteinen), um stabile Amidbindungen zu bilden
• Konserviert die Proteinaktivität mit seinen milden, nicht denaturierenden Reaktionsbedingungen

SATA (N-Succinimidyll S-Acetylacethioacetat) Fügt Proteinen und anderen aminhaltigen Molekülen Sulfhydrylgruppen in geschützter Form hinzu. Das modifizierte Molekül kann unbegrenzt gelagert und mit Hydroxylamin behandelt werden, um die labile Sulfhydrylgruppe für Konjugationsreaktionen bei Bedarf freizulegen. SATA enthält einen N-Hydroxysuccinimid-Ester (NHS), der eine stabile, kovalente Amidbindung mit primären Aminen (d. H. Lysinrückständen und dem Aminotermini von Proteinen) bildet und NHS als Nebenprodukt freisetzt. Die Entfernung des Schutzes (Deacylierung) zur Erzeugung eines freien Sulfhydryls erfolgt mit Hydroxylamin-HCl.

Sulfhydrylgruppen, die auf Proteinen, Peptiden und anderen Verbindungen vorhanden sind, sind für Proteinchemische/Modifikationsreaktionen wichtig. Häufig sind Thiole innerhalb der zu bearbeitenden Moleküle nicht verfügbar oder fehlen. Verschiedene Reagenzien und Verfahren sind für die Einführung von Sulfhydrylgruppen oder Disulfiden in Proteine und Peptide verfügbar, darunter Traut's Reagenz, Varianten von SPDP und Varianten von SATA.

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