Thermo Scientific Heavy and Light Amino Acids werden verwendet, um gezielt die Proteinexpression mittels Massenspektrometrie unter Verwendung von Quantifizierungskits zur stabilen Isotopenmarkierung mit Aminosäuren in der Zellkultur (SILAC) zu analysieren. Dieses lyophilisierte L-Lysin-2HCl-Präparat (4,4,5,5-D4) reicht für 10 SILAC-Experimente.

Allgemeine Merkmale schwerer und leichter Aminosäuren zur SILAC-Markierung:

• Effizient – 100%ige Markierungsintegration in Proteine lebender Zellen
• Flexibel – Verschiedene Isotope schwerer und/oder leichter Aminosäuren für Arginin, Lysin, Leucin und Prolin ermöglichen die Quantifizierung von Peptiden aus Proteasen in MS-Qualität
• Multiplex-Fähigkeit – Es stehen mehrere alternative Isotope von Arginin und Lysin zur Verfügung, die die Analyse mehrerer Behandlungsbedingungen in jedem Experiment ermöglichen
• Hochwertige Supplemente – Schwere Aminosäuren mit > 99 % Isotopenreinheit

Die stabile Isotopenmarkierung mit Aminosäuren in der Zellkultur (SILAC) ist eine leistungsstarke Methode zur Identifizierung und Quantifizierung relativer differenzieller Veränderungen in komplexen Proteinproben. Dieser Ansatz umfasst die metabolische In-vivo-Integration von „schweren“ ¹³C- oder ¹⁵N-markierten Aminosäuren in Proteine, gefolgt von der Massenspektrometrie (MS) zur beschleunigten und umfassenden Identifizierung, Charakterisierung und Quantifizierung von Proteinen.

Thermo Scientific Heavy and Light Amino Acids für SILAC werden zusammen mit speziellen Zellkulturmedien verwendet, in denen essenzielle Aminosäuren fehlen. Schweres und leichtes L-Lysin bzw. L-Arginin sind die am häufigsten für die SILAC-Analyse tryptischer Peptide verwendeten Aminosäuren. Bis zu drei verschiedene Versuchsbedingungen können ohne Weiteres mit unterschiedlichen Lysin- und Arginin-Isotopen analysiert werden. Für Triplex-Experimente mit Lysin- werden 4,4,5,5-D₄ L-Lysin und ¹³C₆ ¹⁵N₂ L-Lysin verwendet. Es entstehen Peptide mit einer Massenverschiebung von 4 und 8 Da, verglichen mit Peptiden, die mit leichtem Lysin erstellt wurden. Für Triplex-Experimente mit Arginin werden ₁₃C₆ L-Arginin und ₁₃C₆ ¹⁵N₄ L-Arginin verwendet. Es entstehen Peptide mit einer Massenverschiebung von 6 und 10 Da, verglichen mit Peptiden, die mit leichtem Arginin erstellt wurden. L-Leucin ist eine der häufigsten Aminosäuren in Proteinsequenzen und kommt ebenfalls oft bei der SILAC-Markierung zum Einsatz. Prolin ist eine nicht-essentielle Aminosäure, die manchmal zu SILAC-Medien hinzugefügt wird, um die metabolische Umwandlung von schwerem Arginin in schweres Prolin in Säugetierzelllinien mit hoher Arginin-Dehydrogenase-Aktivität zu verhindern.

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