Für Protein- und andere biologische Proben, wie Nukleinsäuren, mit einem 50 K MWCO bieten Thermo Scientific Pierce PES-Proteinkonzentratoren eine schnelle Proteinkonzentration, eine hervorragende Probenrückgewinnung und Gerätekompatibilität. Diese Zentrifugalgeräte verfügen über eine High-Flux-Membran aus Polyethersulfon (PES) zur Konzentration, Entsalzung und zum Pufferaustausch biologischer Proben. Dieses Produkt hat einer Molekulargewichtgrenze von 50 K und kann für die Verarbeitung von Probenvolumina von 0,5–100 ml verwendet werden.

Merkmale von PES-Proteinkonzentratoren:
• Schnelle Proteinkonzentration—Die 10- bis 30-fache Probenkonzentration kann in maximal 15 Minuten erreicht werden
• Ausgezeichnete Proteingewinnung—Die typische Proteingewinnung liegt bei ca. 90 % (wenn die Probenmasse mindestens zweimal größer ist als der angegebene MWCO-Wert)
• Gerätekompatibilität— Es kann eine Standard-Mikrozentrifuge mit Ausschwing- oder Festwinkelrotoren (außer 88504) verwendet werden. Die Proben können ohne umgekehrtes Zentrifugieren entnommen und zurückgewonnen werden
• Vielseitig— Einfache Probenkonzentration, Diafiltration oder Pufferaustausch von biologischen Proben

Zur einfachen Erkennung ist der MWCO-Wert auf der Seite jedes Geräts eingeätzt. Zur Erleichterung der Probenzugabe und -rückgewinnung befindet sich ein klares Fenster mit Graduierungen an der Seite jedes Geräts, das eine visuelle Bestimmung des Retentionsvolumens ermöglicht. Das vertikale Design der Membran ermöglicht hohe Flussraten, geringe unspezifische Bindung und vernachlässigbare Proteinaggregation auf der Membran und liefert zuverlässige und konsistente Ergebnisse für die Verarbeitung von Probenvolumina zwischen 0,5 und 100 ml. Die typische Proteinrückgewinnung liegt bei 90 %, wenn die Masse der Proteine in der Probe mindestens das Doppelte des MWCO des verwendeten Geräts übersteigt. Verwenden Sie beispielsweise bei der Verwendung von IgG-Proben (MW ∼150 K) die Konzentratoren mit 5 K, 10 K, 30 K oder 50 K MWCO. Die 10- bis 30-fache Probenkonzentration kann in maximal 15 Minuten erreicht werden.

Proteinkonzentratoren PES-Anwendungen
• Proteinkonzentration von Gewebekulturmedien, Antiserum oder monoklonalen Antikörperpräparaten
• Konzentration von Proteinspitzen nach Gelpermeations-Chromatographie
• Entfernung von nicht inkorporierten Markierungen nach Proteinmodifikationsreaktionen
• Konzentration und Entsalzungs-/Pufferaustausch nach Elution von Protein aus Ionenaustausch, hydrophobe Interaktion (HIC), Metallchelat oder Affinitätschromatographie-Säulen
• Trennung von Molekülen unterschiedlicher Größe

Die Pierce PES-Proteinkonzentratoren enthalten eine Membran, die so ausgelegt ist, dass sie Moleküle mit einem Molekulargewicht zurückhält, das mindestens doppelt so hoch ist wie der MWCO-Wert der PES-Membran im Gerät. Bei Verwendung eines Konzentrators mit Molekülen, die kleiner als die empfohlene Masse sind, kann es zu einer reduzierten Rückgewinnung kommen. Die Proteinrückgewinnung variiert in Abhängigkeit von dem spezifischen Protein in der Probe und seiner Ausgangskonzentration.

Das Totstoppvolumen für die 0,5 ml-, 2 bis 6 ml-, 5 bis 20 ml- und 20 bis 100 ml-Konzentratoren beträgt ca. 15 µl, 30 µl, 50 µl bzw. 350 µl.

Um eine > 90%ige Proteinrückgewinnung mit den 0,5 ml-Konzentratoren zu erreichen, sollte die minimale Proteinprobenkonzentration 0,05 mg/ml betragen. Für allen anderen Konzentratoren sollte die minimale Proteinprobenkonzentration 0,1 mg/ml betragen.

Optimale Zentrifugen und Geschwindigkeiten
Die 0,5 ml-Konzentratoren können mit einer maximalen Zentrifugalkraft von 15.000 × g ausschließlich unter Verwendung einer Festwinkelzentrifuge effektiv eingesetzt werden.

Für die 2-6 ml-Konzentratoren können Ausschwing- oder Festwinkelzentrifugenmodelle verwendet werden. Empfohlen werden Ausschwingzentrifugen, die 2.000 bis 4.000 × g erzeugen können und eine maximale Zentrifugalkraft von 4.000 × g haben. Bei Festwinkelzentrifugen werden Modelle empfohlen, die 5.000 bis 10.000 × g und eine maximale Zentrifugalkraft von 8.000 × g erzeugen können.

Für die Konzentratoren mit einem Volumen von 5 bis 20 ml können Ausschwingbecher- oder Festwinkelzentrifugenmodelle verwendet werden. Empfohlen werden Ausschwingzentrifugen, die 2.000 bis 5.000 × g erzeugen können und eine maximale Zentrifugalkraft von 4.000 × g haben. Bei Festwinkelzentrifugen werden Modelle empfohlen, die 5.000 bis 8.000 × g und eine maximale Zentrifugalkraft von 6.000  g erzeugen können.

Für 20 bis 100 ml-Volumenkonzentratoren werden nur Ausschwingzentrifugen mit einer Leistung von 1.000 bis 2.000 × g empfohlen. Die maximale Zentrifugalkraft sollte 2.000 × g betragen. Diese Konzentratoren werden nicht für den Einsatz in Festwinkelrotoren empfohlen.

Zentrifugalkraft, Temperatur, Probenvolumen, Konzentration und Viskosität wirken sich auf die Filtrationsrate aus. Die Zentrifugationszeit sollte daher für jede Anwendung optimiert werden.