Die Invitrogen Collibri Strang-RNA-Bibliothekvorbereitungs-Kits sind für Sequenzierungen der nächsten Generation (NGS) auf Illumina-Systemen konzipiert. Das Kit unterstützt die vollständige Transkriptom-Sequenzierung (Human, Maus, Ratte) und mRNA-Sequenzierung (kompatibel mit allen Spezies).

Das Collibri Strang-RNA-Bibliotheksvorbereitungskit:
• Enthält alle erforderlichen Komponenten in einem einzigen Kit* für eine schnelle Anwendung
• Gesamt-RNA, die innerhalb von 4,5 Stunden in eine sequenzierungsfähige Bibliothek umgewandelt wurde
• > 98 % Strang-Spezifität, effizienter Nachweis von nicht-codierender RNA und hohe Empfindlichkeit der differenziellen Genexpression
• Bietet prozessinterne visuelle Rückmeldung für einfachere Handhabung
• Eignet sich für die konventionelle Automatisierung zur Steigerung des Durchsatzes

Das Invitrogen Collibri Strang-RNA-Bibliotheksvorbereitungskit für Illumina Systeme wurde für den robusten Aufbau von cDNA-Bibliotheken für die strangspezifische RNA-Sequenzierung auf Illumina Systemen für die Sequenzierung der nächsten Generation (NGS) entwickelt. Das Kit vereint die überlegenen Eigenschaften der reversen Transkriptase SuperScript IV, Dynabeads magnetischen Partikeln und Platinum SuperFi DNA Polymerase, wodurch Anwender qualitativ hochwertige, sequenzierungsfähige Bibliotheken erhalten Dieses Collibri Strang-RNA-Bibliothekvorbereitungskit unterstützt die schnelle Vorbereitung von mRNA oder Transkriptom-Bibliotheken in nur 4,5 Stunden durch Zugabe von 1 bis 25 ng mRNA-angereicherten oder Ribo-depletierter RNA-Proben. Das Multiplexing von Bibliotheken kann mit bis zu 96 einzeln indizierten oder einzigartigen doppelt indizierten Primern durchgeführt werden, was eine Single-Read- und Paired-End-Sequenzierung ermöglicht. Das Kit eignet sich für RNA-Proben verschiedener Qualität, einschließlich FFPE-Proben.

Visuelle Hinweise zur Prozessintegrität
Für maximalen Komfort sind visuelle Hinweise zur Prozessintegrität im gesamten Arbeitsablauf der Bibliotheksvorbereitung enthalten. Überwachen Sie den Fortschritt der Bibliothekserstellung mithilfe visueller Rückmeldungen von Farbstoffen in kritischen Reagenzien. Der Reaktionsmix ändert bei jedem Schritt durch das Hinzufügen kritischer Komponenten die Farbe, um bei der Herstellung der Bibliothek eine hohe Erfolgswahrscheinlichkeit zu gewährleisten. Die inerten Farbstoffe stören keine enzymatischen Reaktionen und beeinträchtigen nicht die Sequenzierungsergebnisse.

Funktionsweise
Mit Illumina kompatible Adapter in voller Länge werden durch PCR-Amplifikation unter Anwendung der Platinum SuperFi DNA-Polymerase eingeführt, um einzeln indizierte oder einzigartige doppelt indizierte Bibliotheken herzustellen, die mit Single-Read- und Paired-End-Sequenzierung kompatibel sind. Das Kit enthält 24 oder 96 einzeln indizierte, barcodierte PCR-Primer (i7), die mit einem Universal-i5-Primer oder einzigartigen doppelt indizierten PCR-Primern vorgemischt werden, die das Multiplexing von bis zu 96 Bibliotheken ermöglichen. Optimierte Reinigungsschritte entfernen effizient Restprimer und Adapter-/Primer-Dimere und bewahren gleichzeitig hohe Bibliotheksausbeuten.

Ein verwandtes Produkt, das Collibri Bibliothekquantifizierungskit, wird für qPCR-basierte Quantifizierungen von Bibliotheken empfohlen, bevor mit der Sequenzierung fortgefahren wird.

Anwendungen
Das Collibri Strang-RNA-Bibliotheksvorbereitungskit wird für folgende Zwecke empfohlen:
• Genexpressionsstudien
• Alternative Spleißanalyse
• Nachweis und Entdeckung nicht-codierender RNA
• Identifizierung alternativer Polyadenylierungsstellen
• Nachweis von Genfusionen
• Nachweis von Transkript-Isoformen

* Das Kit besteht aus enzymatischen Modifikationen, Größenauswahl/Reinigung und indizierten adapterhaltigen Modulen. Ein zusätzliches Ribodepletions-rRNA-Modul (Human/Maus/Ratte) kann ebenfalls enthalten sein.