Ensemble de tampons de perméabilisation et de fixation intracellulaires eBioscience™

Le kit de fixation et de perméabilisation intracellulaire est conçu pour une utilisation dans la coloration intracellulaire et l’analyse cytométrique en flux, et a été spécialement formulé pour réduire la coloration non spécifique des anticorps marqués au fluorochrome et pour augmenter les rapports signal-bruit de fluorescence. Dans la première étape, les cellules vivantes peuvent être “fixées” avec le tampon de fixation, qui réticule les protéines. La deuxième étape, à l’aide du tampon de perméabilisation, crée des trous dans la membrane et permet aux anticorps de coloration intracellulaire d’entrer efficacement dans la cellule. Les étapes suivantes de lavage, les ajouts d’anticorps et les incubations après perméabilisation cellulaire doivent être effectués à l’aide du tampon de perméabilisation. L’étape de lavage finale et la remise en suspension des cellules avant l’analyse de l’échantillon sont effectuées à l’aide du tampon de coloration de cytométrie en flux (réf. 00-4222). Ce kit est couramment utilisé pour colorer les protéines cytoplasmiques ainsi que les protéines présentes dans la voie de sécrétion comme les chimiokines et les cytokines. Il n'est pas recommandé pour la coloration intranucléaire. Reportez-vous plutôt au kit de tampon de facteur de transcription Foxp3 (réf. 00-5523) pour la coloration nucléaire.

Avant l’étape de fixation, il est recommandé de marquer les cellules vivantes à l’aide de l’un des colorants de viabilité fixables (eFluor™ 450, 506, 660, 780, 520 ou 455UV), puis de procéder à la fixation.


Coloration intracellulaire suivie d’une analyse par cytométrie en flux