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Le kit Invitrogen™ Anza™ T4 PNK (polynucléotide kinase) est utilisé pour effectuer la phosphorylation de 5’ de l’ADN et des oligonucléotides. Le PNK T4 présente l’activité des polynucléotides kinase 5’ et phosphatases 3’, catalysant le transfert du phosphate terminal de l’ATP vers un groupe hydroxyle 5’ d’un acide nucléique.
Lors de la préparation de l’ADN pour l’étape de ligature lors du clonage, l’ADN inséré ou l’ADN vecteur doit contenir le phosphate 5’. En général, l’ADN amplifié par PCR est traité avec une PNK T4 afin d’effectuer la phosphorylation de l’extrémité 5’ pour la ligature suivante du clonage.
Avantages : • Incubation rapide en 15 minutes à température ambiante • La phosphorylation peut être réalisée avec de l’ADN ou des oligonucléotides dans des tampons Anza, TE 1X ou de l’eau