eBioscience Intracellular Fixation & Permeabilization Buffer Set

Der Puffersatz für intrazelluläre Fixierung und Permeabilisierung wurde für die intrazelluläre Färbung und die Durchflusszytometrieanalyse mit spezieller Formulierung entwickelt, um die unspezifische Färbung fluorochrommarkierter Antikörper zu reduzieren und das Fluoreszenzsignal-zu-Rauschverhältnis zu erhöhen. Im ersten Schritt können lebende Zellen mit dem Fixierungspuffer „fixiert“ werden, der Proteine vernetzt. Der zweite Schritt mit dem Permeabilisierungspuffer erzeugt Löcher in der Membran und ermöglicht so den intrazellulären Färbeantikörpern, effektiv in die Zelle einzudringen. Nachfolgende Waschschritte, Antikörperzusätze und Inkubationen nach der Zellpermeabilisierung sollten mit dem Permeabilisierungspuffer durchgeführt werden. Der abschließende Reinigungsschritt und die Zellresuspension vor Durchführung der Probe geschieht mit dem Durchflusszytometrie-Färbepuffer (Kat.-Nr. 00-4222). Dieses Kit wird häufig verwendet, um sowohl zytoplasmatische Proteine als auch Proteine im sekretorischen Pfad wie Chemokine und Zytokine zu färben Es wird nicht für die intranukleäre Färbung empfohlen. Nutzen Sie stattdessen das Foxp3/Transkriptionsfaktor-Pufferset (Kat.-Nr. 00-5523) für die Kernfärbung.

Vor dem Fixierungsschritt wird empfohlen, die lebenden Zellen mit einem der fixierbaren Viabilitätfarbstoffe (eFluor™ 450, 506, 660, 780, 520 oder 455UV) zu markieren und anschließend mit der Fixierung fortzufahren.

Berichtete Anwendung
Durchflusszytometrische Analyse, intrazelluläre Färbung gefolgt von Durchflusszytometrieanalyse