Das neuartige Bildgebungskit für Rhod-3-Calcium wurde für die Bildgebung zytosolischer Calciumsignale von lebenden Zellen in Kombination mit grün-fluoreszierenden Farbstoffen oder Proteinen entwickelt. Der rot-fluoreszierende Rhod-3-AM-Farbstoff, der im Bildgebungskit für Rhod-3-Calcium bereitgestellt wird, bietet signifikante Verbesserungen gegenüber bestehenden Farbstoffen für den Nachweis von Ca²⁺. Die Aufnahme in Organellen wurde reduziert, was zu einer besseren zytosolischen Lokalisierung führt. Außerdem weist Rhod-3 AM eine starke Zunahme der Fluoreszenz-Emission nach der Bindung an Calcium auf, wodurch es empfindlicher ist als andere rot-fluoreszierende Calciumfarbstoffe.

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• Im Vergleich zu bestehenden roten Calciumfarbstoffen weist Rhod-3 AM eine starke Zunahme (> 2,5-fach) der Fluoreszenz nach Bindung von Ca²⁺ und eine sehr geringe Fluoreszenz im Ruhezustand (ohne Bindung von Ca²⁺) auf.

• Das enge Emissionsprofil ermöglicht die gleichzeitige Detektion mit GFP oder anderen Farbstoffen.

• Verbesserte zytosolische Lokalisierung für bessere Erkennung von zytosolischen Transienten

Das Bildgebungskit für Rhod-3-Calcium enthält PowerLoad™ Konzentrat für ein einfacheres Diffundieren in Zellen. Aufgrund ihrer einzigartigen Natur kann die PowerLoad™ Lösung mit kompletten Kulturmedien verwendet werden, wodurch die negativen Auswirkungen des Austauschs von Medien oder des Ladens in serumfreien Medien reduziert werden.

Eine firmeneigene, wasserlösliche Form von Probenecid (das üblicherweise zur Hemmung des zellulären Transports verwendet wird und somit das Basisliniensignal reduziert) ist ebenfalls im Lieferumfang des Bildgebungskits für Rhod-3-Calcium enthalten.

Calciumindikatoren sind wichtige Hilfsmittel für die Signaltransduktion und das zellbasierte pharmakologische Screening. In Zellen und Geweben mit blauer oder grüner Autofluoreszenz bieten Calciumindikatoren mit langer (d. h. rotverschobener) Wellenlänge eine Methode, diese überlagernde Autofluoreszenz zu umgehen. Darüber hinaus eignen sich rot verschobene Calciumfarbstoffe gut für Bildgebungsexperimente mit Calcium beim Multiplexing mit grün fluoreszierendem Protein (GFP) oder anderen, grün fluoreszierenden Farbstoffen.

Der Rhod-3-AM-Farbstoff (im Bildgebungskit für Rhod-3-Calcium enthalten) ist ein verbesserter, rotverschobener, Rhodamin-basierter Calciumfarbstoff mit einer zugefügten AM-Ester-Gruppe. Nach der Aufnahme in die Zelle spalten intrazelluläre Esterasen die AM-Gruppe, halten den Farbstoff in der Zelle fest und erzeugen den fluoreszierenden Farbstoff. Bei der Calciumbindung erhöht sich die Fluoreszenzintensität des Farbstoffs. Die spektralen Eigenschaften des Rhod-3-AM-Farbstoffs (Ex/Em = ∼560/600 nm) und die starke Fluoreszenz bei Calciumbindung bieten ein hervorragendes Signalfenster und machen ihn zu dem Calciumfarbstoff mit dem leuchtendsten Rot, den wir im Angebot haben. Zusätzlich zeigt Rhod-3-AM eine gleichmäßigere zytosolische Verteilung und ein verbessertes Signal im Vergleich zu herkömmlichen roten Calciumfarbstoffen wie Rhod-2.