Les protéines G Dynabeads sont des microbilles uniformes et superparamagnétiques de 2,8 μm avec des protéines G recombinantes (∼ 17 kDa) couplées par covalence à la surface. Les protéines G Dynabeads offrent une meilleure alternative à la Sepharose ou à la pâte d’agarose pour l’immunoprécipitation (IP), et des protocoles manuels et automatisés sont disponibles.

• IP en moins de 40 minutes
• Haut rendement de protéines cibles avec faible consommation d’anticorps
• Liaison non spécifique très faible avec un rapport signal-bruit élevé
• Aucune colonne, opérations de centrifugation ni aucun pré-nettoyage chronophage nécessaire
• Grande reproductibilité et haut débit compatibles avec les instruments KingFisher

La séparation manuelle de Dynabeads est rapide et facile à exécuter
Le protocole manuel est simple et peut être exécuté en moins de 40 minutes. Tout d’abord, l’anticorps de la protéine cible est incubé avec les protéines G Dynabeads dans un tube pendant 10 minutes. L’excès d’anticorps est lavé en plaçant le tube dans un aimant DynaMag et en enlevant le surnageant. Les microbilles liées aux anticorps peuvent ensuite être utilisées pour diverses applications en aval, notamment l’IP, le Co-IP, la chromatine IP (ChIP), l’ARN IP (RIP), la purification à petite échelle de l’IgG et la purification des protéines. Les matériaux liés sont facilement rassemblés à l’aide d’un aimant DynaMag, en utilisant les propriétés magnétiques uniques des Dynabeads. La protéine G recombinante sur les billes ne contient pas de site de liaison d’albumine, et par conséquent l’albumine n’est pas co-purifiée pendant la procédure. L’IP est rapide et offre un rendement élevé, une reproductibilité élevée et très peu de liaison non spécifique, un pré-nettoyage n’est donc pas nécessaire.

La séparation Dynabeads automatisée permet d’augmenter le débit et de réduire le temps de manipulation
Si vous travaillez avec plusieurs échantillons en parallèle, le nombre d’étapes de nettoyage et le temps de manipulation augmente proportionnellement avec le nombre d’échantillons. Le pipetage et les autres manipulations manuelles ont tendance à être moins cohérents que l’automatisation lorsqu’ils travaillent avec de nombreux échantillons à la fois. Pour mieux gérer un nombre d’échantillons moyen à haut débit, réduire le temps de manipulation et garantir une reproductibilité élevée, nous avons développé des protocoles IP pour les instruments KingFisher Flex et KingFisher Duo Prime. Les protocoles automatisés répliquent les protocoles manuels, obtenant un rendement protéique cible aussi élevé, la même liaison non spécifique faible et la même reproductibilité élevée. Que vous travailliez avec 10 ou 96 échantillons, la durée du protocole IP est inférieure à 40 minutes, quel que soit le cas. Il vous suffit de charger les réactifs sur les plaques, d’appuyer sur le bouton “Start” (Démarrage) et avant la fin de votre préparation de l’analyse en aval, l’IP est terminée. Une certaine optimisation (par ex., les temps d’incubation) peut être nécessaire en fonction de votre anticorps et de l’abondance et/ou de la spécificité de votre protéine cible.

• Utilisez l’instrument KingFisher Duo pour un débit faible à moyen (1 à 12 échantillons / cycle)
• Utilisez l’instrument KingFisher Flex pour un débit élevé (12 à 96 échantillons / cycle)
Voir les protocoles automatisés
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La séparation non agressive provoque un stress physique minimal des protéines
La technologie de séparation magnétique utilisée par les protéines G Dynabeads est rapide et non agressive, ce qui provoque un stress physique minimal pour vos protéines cibles. Cela permet l’isolement et la concentration des composites labiles qui peuvent autrement se dissocier ou être endommagés par les protéases pendant les longues durées d’incubation. La conformation des protéines natives et les complexes protéiques de grande taille sont préservés.

Force de liaison et capacité
Les protéines G Dynabeads permettent d’isoler la plupart des immunoglobulines (Ig) de mammifères. La quantité d’lg capturées dépend de la concentration d’Ig dans l’échantillon de départ et du type et de la source d’Ig. 100 μl de protéine G Dynabeads– peuvent isoler approximativement 25 à 30 μg d’lgG humaine à partir d’un échantillon contenant 20 à 200 μg d’IgG/ml. La liaison prédominante à Fc permet une orientation optimale de l’lg. Les anticorps se lient à la surface externe lisse des microbilles, et ne sont donc pas piégés dans de grands pores comme les microbilles à base de Sepharose/agarose. Tous les anticorps sont disponibles pour la liaison protéique, afin de n’avoir besoin que de faibles quantités d’anticorps, tout en obtenant toujours le même rendement élevé de protéines cibles. La surface lisse des microbilles est également la raison qui explique le manque de liaison non spécifique des protéines Dynabeads.

Pour en savoir plus sur les protéines Dynabeads
• La protéine A Dynabeads est également disponible sous la forme de tampons “prêts à utiliser” inclus
• Voir les guides, les données et les références de sélection d’immunoprécipitation
• Voir les aimants de séparation des Dynabeads
• Voir les autres produits Dynabeads utiles à d’autres applications

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*Sepharose est une marque commerciale de GE Healthcare Bio-Sciences AB.