Kits TA Cloning

La technologie Invitrogen TA Cloning permet de simplifier considérablement le clonage par restriction et ligature traditionnel, grâce à une stratégie de clonage en une étape permettant de ne plus avoir à apporter de modifications enzymatiques au produit de la PCR, et ce, sans aucun recours à des amorces contenant des sites d’enzymes de restriction.

Les kits Invitrogen TA Cloning reposent sur des bases complémentaires d’adénine (A) et de thymidine (T) sur différents fragments d’ADN afin de les hybrider les uns aux autres. Les produits de la PCR sont amplifiés au moyen d’un ADN polymérase Taq qui vient ajouter une désoxyadénosine simple à l’extrémité 3’ du produit. Les vecteurs linéarisés fournis au sein des kits TA Cloning comportent des résidus de déoxythymidine 3’ (T) qui permettent la ligature efficace de l’insert au niveau du vecteur.

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Rapidité et flexibilité

L’ajout de la fonction de ligase d’ADN T4 ExpressLink Invitrogen au sein des kits TA Cloning permet de réaliser des ligatures à température ambiante en 15 minutes seulement, avec des réactions permettant généralement d’obtenir > 80 % de recombinants avec des inserts.

Les kits TA Cloning sont proposés avec des vecteurs Invitrogen pCR™ 2.1 et pCR™ II. Les promoteurs T7 et Sp6 du vecteur pCR II permettent une transcription in vitro de l’insert en vue de générer des produits de type sens et antisens.		 

Performances et rapport qualité-prix

Les kits TA Cloning sont disponibles sans cellule compétente (K2020-20 et K2020-40) ou avec des cellules E. Coli chimiquement compétentes Invitrogen One Shot INVαF’ (K2000-01 et K2000-40) et des cellules E. coli chimiquement compétentes One Shot TOP10F’ (K2040-01 et K2040-40) dans des formats à 20 et 40 réactions.

Pour un clonage TA Cloning avec vecteur pCR II (promoteur double), des kits sans cellules compétentes (K2750-20 et K2750-40) ou avec des cellules One Shot d’E. coli INVαF’ chimiquement compétentes (K2050-01 et K2050-40) et One Shot TOP10F’ d’E. coli chimiquement compétentes (K2060-01 et K2060-40) sont proposés, dans des formats à 20 et 40 réactions.

Les kits TA Cloning offrent des performances supérieures à celles du “Concurrent P”, ainsi qu’un meilleur rapport qualité-prix.

 Kits TA CloningConcurrent P
Efficacité de clonage80 % (avec contrôle)

60 % (avec contrôle)

Durée de réalisation de la ligature15 minutes1 heure
Température de ligatureTempérature ambianteTempérature ambiante
Purification de PCR requise ?NonRecommandée
Antibiotique sélectifKanamycine et ampicillineAmpicilline uniquement
 

Contenu des kits

Vecteur 
Tampon de ligature 
ADN de l’insert de contrôle  
dNTP 
Eau stérile 
Modèle d’ADN de contrôle 
Tampon de PCR 
Amorces de PCR de contrôle 

En cas d’utilisation d’une enzyme à activité corrective

Les polymérases thermostables possédant une forte activité exonucléasique 3´ à 5´, telles que Invitrogen Platinum SuperFi, ne laissent aucune saillie de A en 3´. Les produits de PCR générés avec de la polymérase Taq permettent un clonage très efficace dans le cadre du système TA Cloning puisque les saillies de A en 3´ ne sont pas éliminées. Néanmoins, si vous utilisez une polymérase à activité corrective ou que vous souhaitez cloner des fragments à extrémités franches, vous pouvez ajouter des saillies de A en 3´, en effectuant une incubation avec Taq à la fin de votre programme de cyclage.

Vous pouvez également essayer le kit de clonage par PCR Invitrogen Zero Blunt. Ce kit permet de cloner de façon efficace des produits de PCR à extrémités franches générés au moyen de polymérases thermostables à action corrective.

Produits associés

Assistance

    Centre d’assistance pour le clonage
    Conseils, aide au dépannage et ressources pour vos applications de clonage

    Formation au clonage
    En savoir plus sur les stratégies de clonage par PCR et les approches de sous-clonage

    Formation à la PCR
    Passez en revue les principes de la PCR, les composants, paramètres de cycle, méthodes et applications

    For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.