Zero Blunt™ PCR-Klonierungskit, ohne kompetente Zellen

Das Zero Blunt™ PCR Cloning Kit bietet eine einfache Methode zur hocheffizienten Klonierung (> 80 %) von PCR-Produkten mit glatten Enden (blunt ends), die mit thermostabilen DNA-Polymerasen mit Korrekturlesefunktion (Proofreading) amplifiziert wurden. Das Zero Blunt™ PCR-Klonierungskit nutzt den vielseitig verwendbaren Klonierungsvektor pCR™-Blunt und ExpressLink™ T4-DNA-Ligase, um ein Ligationsprodukt in einem 5-minütigen Ligationschritt bei Raumtemperatur zu erzeugen.

Merkmale des Zero Blunt™ Cloning™ Kits mit pCR™-Blunt-Vektor:
• Schnell und praktisch – 5-minütige Ligation bei Raumtemperatur
• Effizient – Gen ccdB für eine Ligation bei Raumtemperatur für positive Selektion führt zu > 80 % Klonen mit korrektem Insert
• Flexibel – Wahl von Kanamycin- oder Zeocin™-Resistenz für eine flexible Antibiotika-Selektion

Der pCR™-Blunt-Vektor bietet:
• EcoRI-Schnittstellen zu beiden Seiten der Einfügestelle des PCR-Produkts zur Exzision von Inserts
• T7-Promoter/Primer zur In-vitro-RNA-Transkription und Sequenzierung
• M13-Vorwärts- und Rückwärtsprimer-Stellen für Sequenzierung oder PCR-Screening

Funktionsweise der Zero Blunt™ PCR-Klonierung
Das Zero Blunt™ PCR Cloning Kit ermöglicht die Klonierung von PCR-Fragmenten – oder eines beliebigen DNA-Fragments – mit glatten Enden (blunt ends), mit einem schwachen Hintergrund nicht rekombinanter Klone. Der pCR™-Blunt Vektor enthält das tödliche E. coliccdB Gen, fusioniert mit dem C-Terminus von LacZα (Bernard et al., 1994). Die Ligation eines PCR-Produkts mit glattem Ende unterbricht die Expression der lacZα-ccdB-Genfusion, wodurch nur das Wachstum von positiven Rekombinanten nach der Transformation ermöglicht wird. Zellen, die nicht rekombinanten Vektor enthalten, werden getötet, wenn das Transformationsgemisch plattiert wird.

Kit-Konfigurationen
Das Zero Blunt™ PCR-Klonierungskit wird in einer Vielzahl von Konfigurationen angeboten: Mit One Shot™ TOPO10 chemisch kompetenten E. coli (K2700-20 und K2700-40) und ohne kompetente Zellen (K2750-20 und K2750-40) in Kitgrößen mit 20 und 40 Reaktionen.