TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II Vector and One Shot™ TOP10F' Chemically Competent E. coli
TA Cloning&trade; Kit, Dual Promoter, with pCR&trade;II Vector and One Shot&trade; TOP10F' Chemically Competent <i>E. coli</i>
Invitrogen™

TA Cloning™ Kit, Dual Promoter, with pCR™II Vector and One Shot™ TOP10F' Chemically Competent E. coli

El promotor doble del kit TA Cloning™ con vector pCR™II proporciona una estrategia de clonación rápida y de un pasoMás información
Have Questions?
Cambiar vistabuttonViewtableView
Número de catálogoN.º de reacciones
K20600120 reacciones
K20604040 reacciones
Número de catálogo K206001
Precio (MXN)
-
N.º de reacciones:
20 reacciones
El promotor doble del kit TA Cloning™ con vector pCR™II proporciona una estrategia de clonación rápida y de un paso para insertar directamente un producto de PCR amplificada con Taq en un vector plasmídico. Los promotores T7 y SP6 del vector pCR™II permiten la transcripción in vitro del inserto para producir productos de sentido o antisentido. El promotor doble del kit TA Cloning usa el vector de clonación pCR™II y ligasa de ADN T4 ExpressLink™ para generar un producto de ligadura en un proceso de ligadura de quince minutos a temperatura ambiente. Las reacciones normalmente producen > 80 % de recombinantes que contienen insertos.

Características del Kit de clonación™ de TA Dual Promoter:
Rápido y cómodo: ligación en 15 minutos a temperatura ambiente
Eficaz: detección azul/blanco y > 80 % de los clones con inserto adecuado
Flexible: elección de resistencia a kanamicina o ampicilina para la selección flexible de antibióticos• Sin
complicaciones:
elimina cualquier modificación enzimática del producto de PCR
Optimizado: no requiere el uso de primers de PCR que contengan sitios de restricción

El vector pCR™II proporciona:
• Salientes 3'-T para ligadura directa de productos de PCR amplificada con Taq
• Promotores T7 y SP6 para transcripción y secuenciación de ARN in vitro
• Poliligador versátil con sitios EcoR I flanqueados para fácil escisión de insertos
• Sitios de primer directo e inverso M13 para secuenciación

Cómo funciona TA Cloning™
La polimerasa Taq tiene un actividad no dependiente de la plantilla que añade una sola deoxiadenosina (A) a los extremos 3' de los productos de PCR. El vector linealizado suministrado en este kit tiene residuos de una sola desoxiadenosina 3' (T). Esto permite a los insertos de PCR ligar de forma eficaz con el vector.

Configuraciones del kit
El kit TA Cloning™ se ofrece en una variedad de configuraciones: con E. coli químicamente competente One Shot™ INVF’ (K2050-01 y K2050-40), E. coli químicamente competente One Shot™ TOP10F’ (K2060-01 y K2060-40) y sin células competentes (K2750-20 y K2750-40) en tamaños de kit de 20 y 40 reacciones.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Cepa bacteriana o de levaduraTOP10F ́
Tipo de célulaE. coli químicamente competente
Método de clonaciónTA Cloning
Para utilizar con (aplicación)Clonación PCR
IncluyeVector pCRII linealizado, ligasa de ADN T4 ExpressLink, tampón de ligación de ADN T4 5X ExpressLink, dNTPs, tampón de PCR 10X, agua esterilizada, controles, E. coli químicamente competente TOP10F' One Shot, medio SOC y un plásmido de control superenrollado.
N.º de reacciones20 reacciones
Línea de productosOne Shot
Tipo de productoKit de clonación
PromotorT7, SP6
Cantidad20 reactions
VectorpCRII
FormatoKit
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
Este kit contiene el vector pCR™II linealizado, la ligasa de ADN T4 ExpressLink™, el tampón de ligación de ADN T4 5X ExpressLink™, dNTPs, el tampón de PCR 10X, agua estéril y controles. Los kits de células competentes contienen E. coli químicamente competente One Shot™, medio SOC y un plásmido de control superhelicoidal.

Almacene el E. coli de One Shot™ a - 80 °C. Almacene todos los demás componentes a - 20 °C. Se garantiza la estabilidad de todos los reactivos durante 6 meses si se almacenan correctamente.

Preguntas frecuentes

Can I use TOP10F' competent cells for transformation of my TOPO vector that contains the ccdB gene?

Strains that contain an F plasmid, such as TOP10F', are not recommended for transformation and selection of recombinant clones in any TOPO vector containing the ccdB gene. While the F plasmid does encode the CcdA protein, which acts as an inhibitor of the CcdB gyrase-toxin protein, the half-life of the CcdA protein is shorter than that of the CcdB protein. Overexpression of the CcdB protein causes cell death when its action is not prevented by sufficient CcdA.

Have you compared in vitro transcription levels between SP6 and T7 promoters in your pCRII vectors?

No, we have not done in-house comparisons of transcription levels. It is widely known though that T7 polymerase produces more RNA than SP6 (on the order of 10-fold higher).

Citations & References (141)

Citations & References
Abstract
LMP-1, a LIM-domain protein, mediates BMP-6 effects on bone formation.
Authors:Boden SD, Liu Y, Hair GA, Helms JA, Hu D, Racine M, Nanes MS, Titus L
Journal:Endocrinology
PubMed ID:9832452
Glucocorticoids can promote osteoblast differentiation from fetal calvarial cells and bone marrow stromal cells. We recently reported that glucocorticoid specifically induced bone morphogenetic protein-6 (BMP-6), a glycoprotein signaling molecule that is a multifunctional regulator of vertebrate development. In the present study, we used fetal rat secondary calvarial cultures to determine ... More
Glycoprotein IIb Leu214Pro mutation produces glanzmann thrombasthenia with both quantitative and qualitative abnormalities in GPIIb/IIIa.
Authors:Grimaldi CM, Chen F, Wu C, Weiss HJ, Coller BS, French DL
Journal:Blood
PubMed ID:9473221
Glanzmann thrombasthenia is an inherited bleeding disorder due to a functional reduction or absence of platelet GPIIb/IIIa (alphaIIbbeta3) integrin receptors. Based on a prolonged bleeding time and absence of platelet aggregation in response to physiologic agonists, a 55-year-old white man was diagnosed as having Glanzmann thrombasthenia. The patient's platelet fibrinogen ... More
Type IV collagen is detectable in most, but not all, basement membranes of Caenorhabditis elegans and assembles on tissues that do not express it.
Authors:Graham PL, Johnson JJ, Wang S, Sibley MH, Gupta MC, Kramer JM
Journal:J Cell Biol
PubMed ID:9166416
Type IV collagen in Caenorhabditis elegans is produced by two essential genes, emb-9 and let-2, which encode alpha1- and alpha2-like chains, respectively. The distribution of EMB-9 and LET-2 chains has been characterized using chain-specific antisera. The chains colocalize, suggesting that they may function in a single heterotrimeric collagen molecule. Type ... More
Cloning and characterization of a naturally occurring antisense RNA to human thymidylate synthase mRNA.
Authors:Dolnick BJ
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:8493092
Based upon reverse transcription and polymerase chain reaction results with human KB cell RNA, a cDNA (i.e., 3'rTS1, 1557 nt) with complementarity to thymidylate synthase mRNA was cloned and sequenced. Northern blot analysis showed that 3'rTS1 corresponded to a cytoplasmic 1.8 kb RNA found in several tumor cell lines. The ... More
Distribution and cloning of eukaryotic mRNAs by means of differential display: refinements and optimization.
Authors:Liang P, Averboukh L, Pardee AB
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:8341601
Differential display has been developed as a tool to detect and characterize altered gene expression in eukaryotic cells. The basic principle is to systematically amplify messenger RNAs and then distribute their 3' termini on a denaturing polyacrylamide gel. Here we provide methodological details and examine in depth the specificity, sensitivity ... More