ElectroMAX™ DH10B T1 Phage-Resistant Competent Cells

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ElectroMAX™ DH10B T1 Phage-Resistant Competent Cells

ElectroMAX DH10B T1-Phagen-resistente, kompetente Zellen bieten eine Transformationseffizienz, die zu einer der höchsten unter unseren Produkten gehört und einen WertWeitere Informationen

Katalognummer	Menge
12033015	5 x 100 μl

Katalognummer 12033015

Preis (EUR)

467,00

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Menge:

5 x 100 μl

Preis (EUR)

467,00

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ElectroMAX DH10B T1-Phagen-resistente, kompetente Zellen bieten eine Transformationseffizienz, die zu einer der höchsten unter unseren Produkten gehört und einen Wert von 1 x 10¹⁰ KbE/µg Plasmid-DNA übersteigen kann. Ideal für hocheffiziente Transformationsanwendungen, einschließlich der Erzeugung von cDNA- und gDNA-Bibliotheken. ElectroMAX DH10B Zellen:

• Maximieren die Ausbeute von Transformanten aus Produkten mit begrenztem Klonieren
• Ermöglichen effiziente Klonierung von methylierter genomischer DNA
• Resistent gegen T1- und T5-Bakteriophagen
• Unterstützen Blau-Weiß-Screenings durch α-Ergänzung auf Platten mit X-Gal oder Bluo-Gal
• Liefern eine hohe Ausbeute bei Plasmidpräparationen für Downstream-Prozesse

Phagen-resistente, repräsentative Bibliotheken aus einer einzigen Transformation
Die tonA-Mutation in DH10B-Zellen verleiht Resistenz gegen T1- und T5-Bakteriophagen und schützt so wertvolle Bibliotheken vor Kontaminationen. Darüber hinaus machen Mutationen im methylierungsabhängigen Restriktionssystem (mcrA, mcrBC und mrr) ElectroMAX DH10B T1-Phagen-resistente Zellen ideal für den Aufbau genomischer Bibliotheken aus prokaryotischer und eukaryotischer genomischer DNA und ermöglichen eine effiziente Plasmid-Rettung aus eukaryotischen Genomen. ElectroMAX DH10B T1-Phagen-resistente Zellen eignen sich auch für den Aufbau von Genbanken, für die Erstellung von cDNA-Bibliotheken mit Plasmid-abgeleiteten Vektoren sowie für Situationen, in denen die Menge der DNA begrenzt ist. Dieser Stamm weist zudem den Genotyp Φ80lacZΔM15 auf, sodass Blau-Weiß-Screenings auf Platten entweder mit X-Gal oder Bluo-Gal möglich sind. Schließlich ist die endA1-Mutation von DH10B ein hervorragendes Mittel zur Amplifikation von Plasmid-DNA für die anschließende Extraktion und Reinigung.

Genotyp: F^-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139Δ(ara, leu)7697 galU galK λ^-rpsL nupG tonA

Finden Sie den benötigten Stamm und das gewünschte Format
DH10B-Zellen sind sowohl in elektrokompetenten als auch in chemisch kompetenten Formaten erhältlich. Unsere ElectroMAX DH10B-Zellen eignen sich auch für den Aufbau von cDNA- oder gDNA-Bibliotheken, sind jedoch nicht resistent gegen T1- und T5-Phagen-Infektionen. Unsere MegaX DH10B-T1^R elektrokompetenten Zellen haben die höchste Transformationseffizienz (> 3 x 10¹⁰ KbE/µg Plasmid-DNA) und bieten außerdem den Vorteil der T1- und T5-Phagen-Resistenz.

Nur für Forschungszwecke. Nicht zur Verwendung bei diagnostischen Verfahren.

Specifications

Bakterielle AntibiotikaresistenzYes (Streptomycin)

Blau-Weiß-ScreeningJa

Klonierung methylierter DNAJa

Klonierung instabiler DNANicht geeignet zum Klonen instabiler DNA

Enthält F'-EpisomF'-Episom fehlt

Hochdurchsatz-KompatibilitätNicht mit hohen Durchsatz kompatibel (manuell)

Verbessert die PlasmidqualitätJa

PlasmidKann für Plasmide >20 kb verwendet werden

Vorbereitung von nicht methylierter DNANicht geeignet für die Vorbereitung von nicht methylierter DNA

ProduktlinieDH10B, ElectroMAX

ProdukttypKompetente Zelle

Menge5 x 100 μl

Reduziert RekombinationJa

VersandbedingungTrockeneis

T1-Phage – resistent (TonA)Ja

TransformationsleistungsgradHoher Wirkungsgrad (> 10^9 cfu⁄µg)

FormatRörchen

SpeziesE. coli

Unit SizeEach

Inhalt und Lagerung

Enthält:
• ElectroMAX DH10B T1-Phagen-resistente Zellen: 5 Fläschchen, je 100 µl
• pUC19 DNA (10 pg/µl): 1 Fläschchen, 50 µl
• S.O.C.-Medium: 2 Flaschen, je 6 ml

Kompetente Zellen bei -80 °C lagern. pUC19-DNA bei -20 °C lagern. S.O.C.-Medium bei 4 °C oder Raumtemperatur lagern.

Häufig gestellte Fragen (FAQ)

How do you recommend that I prepare my DNA for successful electroporation of E. coli?

For best results, DNA used in electroporation must have a very low ionic strength and a high resistance. A high-salt DNA sample may be purified by either ethanol precipitation or dialysis.

The following suggested protocols are for ligation reactions of 20ul. The volumes may be adjusted to suit the amount being prepared.

Purifying DNA by Precipitation: Add 5 to 10 ug of tRNA to a 20ul ligation reaction. Adjust the solution to 2.5 M in ammonium acetate using a 7.5 M ammonium acetate stock solution. Mix well. Add two volumes of 100 % ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at 4C. Remove the supernatant with a micropipet. Wash the pellet with 60ul of 70% ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at room temperature. Remove the supernatant with a micropipet. Air dry the pellet. Resuspend the DNA in 0.5X TE buffer [5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (pH 7.5)] to a concentration of 10 ng/ul of DNA. Use 1 ul per transformation of 20 ul of cell suspension.

Purifying DNA by Microdialysis: Float a Millipore filter, type VS 0.025 um, on a pool of 0.5X TE buffer (or 10% glycerol) in a small plastic container. Place 20ul of the DNA solution as a drop on top of the filter. Incubate at room temperature for several hours. Withdraw the DNA drop from the filter and place it in a polypropylene microcentrifuge tube. Use 1ul of this DNA for each electrotransformation reaction.

When should DMSO, formamide, glycerol and other cosolvents be used in PCR?

Cosolvents may be used when there is a failure of amplification, either because the template contains stable hairpin-loops or the region of amplification is GC-rich. Keep in mind that all of these cosolvents have the effect of lowering enzyme activity, which will decrease amplification yield. For more information see P Landre et al (1995). The use of co-solvents to enhance amplification by the polymerase chain reaction. In: PCR Strategies, edited by MA Innis, DH Gelfand, JJ Sninsky. Academic Press, San Diego, CA, pp. 3-16.

Additionally, when amplifying very long PCR fragments (greater than 5 kb) the use of cosolvents is often recommended to help compensate for the increased melting temperature of these fragments.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

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Zitierungen und Referenzen

Abstract

McrA and McrB restriction phenotypes of some E. coli strains and implications for gene cloning.

Authors:Raleigh EA, Murray NE, Revel H, Blumenthal RM, Westaway D, Reith AD, Rigby PW, Elhai J, Hanahan D,

Journal:Nucleic Acids Res

PubMed ID:2831502

'The McrA and McrB (modified cytosine restriction) systems of E. coli interfere with incoming DNA containing methylcytosine. DNA from many organisms, including all mammalian and plant DNA, is expected to be sensitive, and this could interfere with cloning experiments. The McrA and B phenotypes of a few strains have been ... More

Quantitative evaluation of Escherichia coli host strains for tolerance to cytosine methylation in plasmid and phage recombinants.

Authors:Woodcock DM, Crowther PJ, Doherty J, Jefferson S, DeCruz E, Noyer-Weidner M, Smith SS, Michael MZ, Graham MW,

Journal:Nucleic Acids Res

PubMed ID:2657660

Many strains of E. coli K12 restrict DNA containing cytosine methylation such as that present in plant and animal genomes. Such restriction can severely inhibit the efficiency of cloning genomic DNAs. We have quantitatively evaluated a total of 39 E. coli strains for their tolerance to cytosine methylation in phage ... More

Properties of the FhuA channel in the Escherichia coli outer membrane after deletion of FhuA portions within and outside the predicted gating loop.

Authors:Killmann H, Benz R, Braun V,

Journal:J Bacteriol

PubMed ID:8955314

Escherichia coli transports Fe3+ as a ferrichrome complex through the outer membrane in an energy-dependent process mediated by the FhuA protein. A FhuA deletion derivative lacking residues 322 to 355 (FhuA delta322-355) forms a permanently open channel through which ferrichrome diffused. This finding led to the concept that the FhuA ... More

Differential plasmid rescue from transgenic mouse DNAs into Escherichia coli methylation-restriction mutants.

Authors:Grant SG, Jessee J, Bloom FR, Hanahan D,

Journal:Proc Natl Acad Sci U S A

PubMed ID:2162051

Plasmids comprising transgene insertions in four lines of transgenic mice have been retrieved by plasmid rescue into a set of Escherichia coli strains with mutations in different members of the methylation-dependent restriction system (MDRS). Statistical analysis of plasmid rescue frequencies has revealed that the MDRS loci detect differential modifications of ... More