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Sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ III
El sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ III para RT-PCR está optimizado para la síntesis de la primera cadenaMás información
| Número de catálogo | Cantidad |
|---|---|
| 18080051 | 50 rxns |
Número de catálogo 18080051
Precio (CLP)
600.001
Each
Cantidad:
50 rxns
Precio (CLP)
600.001
Each
El sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ III para RT-PCR está optimizado para la síntesis de la primera cadena de ADNc a partir de ARN total o poli (A)+ purificado. Con este sistema, pueden detectarse objetivos de ARN de 100 bp a >12 kb. La cantidad de material de partida puede variar entre 1 pg y 5 µg de ARN total. La transcriptasa inversa SuperScript™ III es una versión de la RT M-MLV que se ha diseñado para reducir la actividad de ARNasa H y proporcionar mayor estabilidad térmica. La enzima se utiliza para sintetizar ADNc en un intervalo de temperatura de 42–55 °C, lo que proporciona una mayor especificidad, mayor producción de ADNc y más cantidad de producto de cadena completa que otras transcriptasas inversas. Como la RT SuperScript™ III no se ve significativamente inhibida por el ARN de transferencia y ribosomal, se puede emplear para sintetizar la primera cadena de ADNc a partir de una preparación de ARN total.
Uso del sistema de primera cadena SuperScript™ III
La síntesis de ADNc se realiza en el primer paso mediante ARN total o ARN seleccionado poli(A)+ cebado con oligo(dT), cebadores aleatorios o un cebador específico de genes. En el segundo paso, la PCR se realiza en un tubo independiente con cebadores específicos para el gen de interés. Para la PCR, recomendamos una de las siguientes ADN polimerasas: La ADN polimerasa Platinum™ Taq proporciona condiciones de inicio en caliente automático para una mayor especificidad de hasta 4 kb, la ADN polimerasa de alta fidelidad Platinum™ Taq proporciona un resultado superior y alta fidelidad para objetivos de hasta 15 kb y la ADN polimerasa Platinum™ Pfx proporciona una fidelidad máxima para objetivos de hasta 12 kb.
Uso del sistema de primera cadena SuperScript™ III
La síntesis de ADNc se realiza en el primer paso mediante ARN total o ARN seleccionado poli(A)+ cebado con oligo(dT), cebadores aleatorios o un cebador específico de genes. En el segundo paso, la PCR se realiza en un tubo independiente con cebadores específicos para el gen de interés. Para la PCR, recomendamos una de las siguientes ADN polimerasas: La ADN polimerasa Platinum™ Taq proporciona condiciones de inicio en caliente automático para una mayor especificidad de hasta 4 kb, la ADN polimerasa de alta fidelidad Platinum™ Taq proporciona un resultado superior y alta fidelidad para objetivos de hasta 15 kb y la ADN polimerasa Platinum™ Pfx proporciona una fidelidad máxima para objetivos de hasta 12 kb.
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Especificaciones
Tipo de producto finalPrimera cadena de ADNc
FormatoKit
N.º de reacciones50 reacciones
Temperatura óptima de reacción50 °C
Cantidad50 rxns
Formato de reacciónComponentes separados
Tipo de reactivoTranscripción reversa
Transcriptasa inversaSuperScript III
Condiciones de envíoHielo seco
Material de partidaARN
TécnicaTranscripción reversa
Para utilizar con (aplicación)Real Time PCR (qPCR), RT-PCR
GC-Rich PCR PerformanceAlto
Velocidad de reacción50 min
Unit SizeEach
Contenido y almacenamiento
El sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ III para RT-PCR se suministra con lo siguiente:
• Oligo(dT)20 (50 μm), 50 μl
• Hexámeros aleatorios (50 ng/μl), 250 μl
• de tampón RT 10X, 1 ml
• 0,1 m de DTT, 250 μl
• 25 mm de cloruro magnésico, 500 μl
• 10 mm de mezcla de dNTP, 250 μl
• RT SuperScript III (200 U/μl), 50 μl
• RNaseOUT (40 U/μl), 100 μl
• ARNasa H de E. coli (2 U/μl), 50 μl
• Agua tratada con DEPC, 1,2 ml
• ARN HeLa total (10 ng/μl), 20 μl
• Cebador de control sentido (10 μm), 25 μl
• Cebador de control antisentido (10 μm), 25 μl
Suficiente para 50 reacciones según un tamaño de reacción de 20 μl. Almacenar a – 20 °C.
• Oligo(dT)20 (50 μm), 50 μl
• Hexámeros aleatorios (50 ng/μl), 250 μl
• de tampón RT 10X, 1 ml
• 0,1 m de DTT, 250 μl
• 25 mm de cloruro magnésico, 500 μl
• 10 mm de mezcla de dNTP, 250 μl
• RT SuperScript III (200 U/μl), 50 μl
• RNaseOUT (40 U/μl), 100 μl
• ARNasa H de E. coli (2 U/μl), 50 μl
• Agua tratada con DEPC, 1,2 ml
• ARN HeLa total (10 ng/μl), 20 μl
• Cebador de control sentido (10 μm), 25 μl
• Cebador de control antisentido (10 μm), 25 μl
Suficiente para 50 reacciones según un tamaño de reacción de 20 μl. Almacenar a – 20 °C.
Preguntas frecuentes
I am interested in generating cDNA from total RNA. What is the difference between SuperScript III Reverse Transcriptase and SuperScript III First Strand Synthesis System for RT-PCR?
How long can I store the cDNA from my reverse transcription step?
How can I remove genomic DNA contamination from my sample prior to performing RT-PCR?
How much RNA should be employed for first-strand cDNA synthesis?
Should I treat the cDNA with RNase H prior to downstream processing?
Citations & References (7)
Citations & References
Abstract
The UL41 protein of herpes simplex virus 1 degrades RNA by endonucleolytic cleavage in absence of other cellular or viral proteins.
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:16477041
The herpes simplex virus 1 ORF UL41 encodes a protein (virion host shutoff or vhs) associated with selective degradation of mRNA early in infection. Some mRNAs, exemplified by GAPDH or beta-actin mRNAs, are degraded rapidly. Others, for example IEX-1 mRNA, are degraded in two stages: whereas the 3' domain disappears
Transcriptional profiling of rhesus monkey embryonic stem cells.
Journal:Biol Reprod
PubMed ID:16943365
Embryonic stem cells (ESCs) may be able to cure or alleviate the symptoms of various degenerative diseases. However, unresolved issues regarding survival, functionality, and tumor formation mean a prudent approach should be adopted towards advancing ESCs into human clinical trials. The rhesus monkey provides an ideal model organism for developing
Novel GC-rich DNA-binding compound produced by a genetically engineered mutant of the mithramycin producer Streptomyces argillaceus exhibits improved transcriptional repressor activity: implications for cancer therapy.
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:16571899
The aureolic acid antibiotic mithramycin (MTM) binds selectively to GC-rich DNA sequences and blocks preferentially binding of proteins, like Sp1 transcription factors, to GC-rich elements in gene promoters. Genetic approaches can be applied to alter the MTM biosynthetic pathway in the producing microorganism and obtain new products with improved pharmacological
Temperature-modulated diversity of TRPV4 channel gating: activation by physical stresses and phorbol ester derivatives through protein kinase C-dependent and -independent pathways.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:12738791
The TRPV4 calcium-permeable channel was cloned from mouse kidney M-1 cells, and the effect of temperature modulation on channel gating/activation by physical and chemical signals was evaluated. A TRPV4 cDNA construct with a C-terminal V5 epitope was stably transfected into human embryonic kidney (HEK) 293 and Chinese hamster ovary cells
Endogenous 24(S),25-epoxycholesterol fine-tunes acute control of cellular cholesterol homeostasis.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:17981807
Certain oxysterols, when added to cultured cells, are potent regulators of cholesterol homeostasis, decreasing cholesterol synthesis and uptake and increasing cholesterol efflux. However, very little is known about whether or not endogenous oxysterol(s) plays a significant role in cholesterol homeostasis. 24(S),25-Epoxycholesterol (24,25EC) is unique among oxysterols in that it is