PureQuant™ CD8+ T-Zellen-Assay

Die Applied Biosystems PureQuant-Assays sind eine Reihe von Assays, die spezifische Immunzelltypen in einer gemischten Zellpopulation genau identifizieren und quantifizieren. Diese Assays basieren auf TaqMan qPCR und messen die genomische DNA-Methylierung an bestimmten Standorten, die als eindeutige Kennung dienen. Die Assays umfassen Standards und Kontrollen, und jede 96-Well-Platte kann bis zu sieben Testproben aufnehmen. Die Ergebnisse werden mit einem kostenlosen Analysewerkzeug als Prozentsatz des Zielzelltyps aus den gesamten Eingabezellen bereitgestellt.

Der PureQuant CD8+ T-Zellen-Assay nutzt das CD8B-Gen als epigenetischen Marker für CD8+ T-Zellen; der Assay zielt auf regulierende Elemente innerhalb seines dritten Introns ab (siehe http://stm.sciencemag.org/content/10/452/eaan3508).

Die Vorteile sind u. a.:
• Bewährte Leistung – Kerntechnologie wird seit mehr als ein Jahrzehnt zur Identifizierung und Quantifizierung von Immunzelltypen verwendet
• Einfach standardisiert – die qPCR-Methode ermöglicht konsistente Ergebnisse über mehrere Anwender, Geräte und Standorte hinweg
• Erleichtert die Einreichung von Zulassungsanträgen – festgelegte Leistungsspezifikationen gemäß den ICHQ2(R1)-Richtlinien
• Planungsflexibilität – der Assay kann mit frischen oder gefrorenen Zellen/gDNA durchgeführt werden

Die Assays enthalten alle Reagenzien, Standards und Kontrollen, die für die Ausführung des Assays erforderlich sind. Die Komponenten umfassen:
• Kalibrator: Korrigiert Abweichungen bei der Effizienz der Bisulfitkonvertierung. Der Plasmid-basierte Kalibrator beherbergt die genomischen Zielregionen in äquimolaren Verhältnissen und enthält GAPDH. Wird einer Bisulfitkonvertierung unterzogen, gefolgt von einer Schätzung der Anzahl der Kopien über die qPCR-Standardkurve. Ermöglicht die Schätzung des Assay-spezifischen Bisulfit-Wirkungsfaktors: Das Verhältnis zwischen TPG/GAPDH-Kopienzahlen, gemessen vom selben Plasmid.
• Referenz: Prüft die Assay-Leistung. Besteht aus genomischer DNA, die aus menschlichem Blut gepoolter gesunder Spender gewonnen wird. Die Referenzwerte stellen den erwarteten Bereich des Zielzellentyps dar. CD8+-Zellen sind beispielsweise im Allgemeinen häufiger als Treg- oder Th17-Zellen.
• Standards: Ermitteln die unbekannte Anzahl der Kopien. Bestehen aus sechs Verdünnungen, die einen linearen dynamischen Bereich von 4 Logs (30 bis 31250 Kopien) abdecken. Absolute Kopienzahlen können zuverlässig über die Steigung und den Achsenabschnitt der jeweiligen Standardkurven bestimmt werden.

Dieses Produkt wird an einem Standort mit einem ISO9001-zertifizierten Qualitätsmanagementsystem hergestellt.