ElectroMAX™ DH10B T1 Phage-Resistant Competent Cells

Citations & References (4)

Invitrogen™

ElectroMAX™ DH10B T1 Phage-Resistant Competent Cells

ElectroMAX DH10B T1ファージ耐性コンピテントセルは、当社が提供する製品の中でもっとも高い形質転換効率を提供し、1 x 1010 cfu/µgのプラスミドDNA効率を超えることができます。cDNAやgDNAライブラリ構築など、高効率な形質転換を必要とするアプリケーションに最適です詳細を見る

製品番号（カタログ番号）	数量
12033015	5 x 100 μL

製品番号（カタログ番号） 12033015

価格（JPY）

84,000

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5 x 100 μL

ElectroMAX DH10B T1ファージ耐性コンピテントセルは、当社が提供する製品の中でもっとも高い形質転換効率を提供し、1 x 10¹⁰ cfu/µgのプラスミドDNA効率を超えることができます。cDNAやgDNAライブラリ構築など、高効率な形質転換を必要とするアプリケーションに最適です。ElectroMAX DH10Bセル：

•限られたクローニング製品から形質転換体の収率を最大化します。
• メチル化DNAの効率的なクローニングを可能にします。
•T1およびT5バクテリオファージに耐性があります。
•X-GalまたはBluo-Galを含むプレート上でのα-相補により、青/白スクリーニングをサポートします。
•ダウンストリームアプリケーション用の高収量プラスミド調製を提供します。

単一形質転換からのファージ耐性代表ライブラリー
DH10B細胞のtonA突然変異は、バクテリオファージT1およびT5に対する耐性を付与し、貴重なライブラリを汚染から保護します。さらに、メチル化依存の制限系（mcrA、mcrBC、mrr）の変異により、ElectroMAX DH10B T1ファージ耐性セルは原核生物および真核生物両方のゲノムDNA のゲノムライブラリの構築に最適で、真核生物ゲノムからの効率的なプラスミドレスキューが可能になります。ElectroMAX DH10B T1ファージ耐性セルは、遺伝子バンクの構築、プラスミド由来ベクターを用いたcDNAライブラリの生成、およびDNAが制限されている状況に適しています。また、この株はΦ80lacZΔM15遺伝子型もあり、X-GalまたはBluo-Galを含むプレート上での青/白スクリーニングのオプションを提供します。最後に、endA1変異により、DH10Bは、その後の抽出および精製のためにプラスミドDNAを増幅するための優れた媒体となります。

遺伝子型：F^-mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139Δ(ara, leu)7697 galU galK λ^-rpsL nupG tonA

必要な株とフォーマットを探す
DH10Bセルは、エレクトロコンピテントなフォーマットと化学的コンピテントなフォーマットの両方で利用可能です。当社のElectroMAX DH10Bセルは、cDNAやgDNAのライブラリ構築にも適していますが、T1およびT5のファージ感染に対する耐性はありません。当社のMegaX DH10B T1^R Electrocomp細胞は、最高の形質転換効率（>3 x 10¹⁰ cfu/µgプラスミドDNA）を有し、T1およびT5のファージ抵抗性の利点も提供します。

研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。

抗生物質耐性菌Yes (Streptomycin)

青／白スクリーニング可

メチル化DNAのクローニング可

不安定DNAのクローニング不安定なDNAのクローニングには不適

F'エピソームを含むF’エピソームが欠落しています

高スループット適合性ハイスループット非対応（手動）

プラスミドの品質を向上可

プラスミドプラスミド>20 kb に使用可能

非メチル化DNAの調製非メチル化DNAの調製には適していません

製品ラインDH10B、ElectroMAX

製品タイプコンピテントセル

数量5 x 100 μL

組換えを抑制可

出荷条件ドライアイス

T1ファージ－耐性（tonA）可

形質転換効率レベル高効率（> 10^9 cfu⁄µg）

フォーマットチューブ

種E. coli

Unit SizeEach

組成および保存条件

内容：
•ElectroMAX DH10B T1ファージ耐性セル：5バイアル、各100 µl
• pUC19 DNA（10 pg/µl）：1バイアル、50 µL
• S.O.C.培地：

2 ボトル、各 6 ml、コンピテントセルは-80℃で保存します。pUC19 DNAは-20℃で保存してください。SOC培地は4℃または室温で保存してください。

よくあるご質問（FAQ）

How do you recommend that I prepare my DNA for successful electroporation of E. coli?

For best results, DNA used in electroporation must have a very low ionic strength and a high resistance. A high-salt DNA sample may be purified by either ethanol precipitation or dialysis.

The following suggested protocols are for ligation reactions of 20ul. The volumes may be adjusted to suit the amount being prepared.

Purifying DNA by Precipitation: Add 5 to 10 ug of tRNA to a 20ul ligation reaction. Adjust the solution to 2.5 M in ammonium acetate using a 7.5 M ammonium acetate stock solution. Mix well. Add two volumes of 100 % ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at 4C. Remove the supernatant with a micropipet. Wash the pellet with 60ul of 70% ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at room temperature. Remove the supernatant with a micropipet. Air dry the pellet. Resuspend the DNA in 0.5X TE buffer [5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (pH 7.5)] to a concentration of 10 ng/ul of DNA. Use 1 ul per transformation of 20 ul of cell suspension.

Purifying DNA by Microdialysis: Float a Millipore filter, type VS 0.025 um, on a pool of 0.5X TE buffer (or 10% glycerol) in a small plastic container. Place 20ul of the DNA solution as a drop on top of the filter. Incubate at room temperature for several hours. Withdraw the DNA drop from the filter and place it in a polypropylene microcentrifuge tube. Use 1ul of this DNA for each electrotransformation reaction.

When should DMSO, formamide, glycerol and other cosolvents be used in PCR?

Cosolvents may be used when there is a failure of amplification, either because the template contains stable hairpin-loops or the region of amplification is GC-rich. Keep in mind that all of these cosolvents have the effect of lowering enzyme activity, which will decrease amplification yield. For more information see P Landre et al (1995). The use of co-solvents to enhance amplification by the polymerase chain reaction. In: PCR Strategies, edited by MA Innis, DH Gelfand, JJ Sninsky. Academic Press, San Diego, CA, pp. 3-16.

Additionally, when amplifying very long PCR fragments (greater than 5 kb) the use of cosolvents is often recommended to help compensate for the increased melting temperature of these fragments.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.

引用および参考文献 (4)

引用および参考文献

Abstract

McrA and McrB restriction phenotypes of some E. coli strains and implications for gene cloning.

Authors:Raleigh EA, Murray NE, Revel H, Blumenthal RM, Westaway D, Reith AD, Rigby PW, Elhai J, Hanahan D,

Journal:Nucleic Acids Res

PubMed ID:2831502

'The McrA and McrB (modified cytosine restriction) systems of E. coli interfere with incoming DNA containing methylcytosine. DNA from many organisms, including all mammalian and plant DNA, is expected to be sensitive, and this could interfere with cloning experiments. The McrA and B phenotypes of a few strains have been ... More

Quantitative evaluation of Escherichia coli host strains for tolerance to cytosine methylation in plasmid and phage recombinants.

Authors:Woodcock DM, Crowther PJ, Doherty J, Jefferson S, DeCruz E, Noyer-Weidner M, Smith SS, Michael MZ, Graham MW,

Journal:Nucleic Acids Res

PubMed ID:2657660

Many strains of E. coli K12 restrict DNA containing cytosine methylation such as that present in plant and animal genomes. Such restriction can severely inhibit the efficiency of cloning genomic DNAs. We have quantitatively evaluated a total of 39 E. coli strains for their tolerance to cytosine methylation in phage ... More

Properties of the FhuA channel in the Escherichia coli outer membrane after deletion of FhuA portions within and outside the predicted gating loop.

Authors:Killmann H, Benz R, Braun V,

Journal:J Bacteriol

PubMed ID:8955314

Escherichia coli transports Fe3+ as a ferrichrome complex through the outer membrane in an energy-dependent process mediated by the FhuA protein. A FhuA deletion derivative lacking residues 322 to 355 (FhuA delta322-355) forms a permanently open channel through which ferrichrome diffused. This finding led to the concept that the FhuA ... More

Differential plasmid rescue from transgenic mouse DNAs into Escherichia coli methylation-restriction mutants.

Authors:Grant SG, Jessee J, Bloom FR, Hanahan D,

Journal:Proc Natl Acad Sci U S A

PubMed ID:2162051

Plasmids comprising transgene insertions in four lines of transgenic mice have been retrieved by plasmid rescue into a set of Escherichia coli strains with mutations in different members of the methylation-dependent restriction system (MDRS). Statistical analysis of plasmid rescue frequencies has revealed that the MDRS loci detect differential modifications of ... More