BaculoDirect™ Baculovirus Expression Systemは、昆虫細胞における高レベルのタンパク質発現のための強力で汎用性の高い真核生物システムです。Gateway™テクノロジーとバキュロウイルス発現を組み合わせることで、BaculoDirect Systemで組換えバキュロウイルスを迅速かつ簡単に生成できます。

ワークフロー：
BaculoDirect™ Linear DNA（バキュロウイルスゲノム）は、Gatewayエントリークローンで迅速かつ効率的に組換えを行うために、attR部位を含めるように設計されています。目的の遺伝子は、シンプルな1時間のLR反応を使用して、エントリークローンからBaculoDirect Linear DNAに組換えられます（図1）。結果として得られる反応ミックスには、目的遺伝子を持つ組換えバキュロウイルスが含まれ、昆虫細胞のトランスフェクションに使用されます。細菌を形質転換して大規模なバクミドを単離したり、または転送ベクターとリニアバキュロウイルスDNAの昆虫細胞への相互トランスフェクションを行ったりする必要がなくなります。その結果、ハンズオン時間が大幅に短縮されます。浄化されたバキュロウイルスは1週間以内に単離できます。

Gateway線形DNA
BaculoDirect Linear DNAは、Gatewayエントリークローンでの迅速なクローニングと、その後のSf9またはSf21昆虫細胞における発現のために設計されています。Linear DNAの特徴：

•高レベルでの発現用の強力なポリヘドリンプロモーター
• 任意のattL側Gatewayエントリーベクターを使用した効率的な組換えのためのR部位
• ガンシクロビルを使用したネガティブ選択のためのTK遺伝子
• 抗V5抗体での検出およびニッケルキレート樹脂での浄化ためのC末端V5-Hisタグ（BaculoDirect™ C-Term Expression Kit）またはN末端V5-Hisタグ（BaculoDirect™ N-Term Expression Kit）
• V5-Hisタグの除去とそれに続く浄化のためのTEVプロテアーゼ切断部位（BaculoDirect N-Termic Expression Kit）
• 純粋なバキュロウイルスストックが確実に生成されるようにするLacZ遺伝子。これは、LR組換え反応後、目的の遺伝子に置き換えられます。

必要な追加の原材料、個別に使用可能：Gatewayエントリークローン。

アプリケーションに最適なGatewayエントリーベクターの選択ガイドについては、www.thermofisher.com/Gatewayをご覧ください。