Active Ras Pull-Down and Detection Kit

Thermo Scientific活性型Rasプルダウンおよび検出キットは、Raf1タンパク質結合ドメインとの特異的なタンパク質相互作用により、GTP結合Ras GTPaseの選択的濃縮と検出を可能にします。

活性型Rasプルダウンおよび検出キットには、精製したGST-Raf1 Ras結合ドメイン（RBD）、グルタチオンアガロースレジン、ポジティブコントロールおよびネガティブコントロール（それぞれGTPγSおよびGDP）、溶解／結合／洗浄バッファー、抗Ras抗体、SDSサンプルバッファー、スピンカラム、および収集チューブが含まれます。このキットは、堅牢なRas活性を持つことが知られている細胞株、NIH 3T3細胞のライセートを使用して検証されています。

活性型Rasプルダウンおよび検出キットの特長：

•高感度かつ高精度 — 最適化された試薬、特異的抗Ras抗体、およびウェスタンブロット法により、正確なコントロールと定量結果を保証
• 検証済み — 検査済みのRas検出機能で品質と性能を保証
• 適合性 — マウス、ラット、およびヒト由来のさまざまな細胞タイプに対応

アプリケーション：
• 細胞の分化、移動、分裂、細胞骨格の再配列中のRas GTPaseの活性化の追跡
• がんおよび血管新生における活性型Rasの役割の研究
• 増殖因子による刺激後のRas活性のモニタリング
• 小分子阻害剤のRas活性への影響のスクリーニング

活性型Rasプルダウンおよび検出キットは、GTPγSで処理した細胞溶解物を使用して内因性Rasを活性化し、GDP処理ライセートと比較して低分子量GTPaseを不活性化することにより、活性型Ras濃縮方法の機能と特異性を検証しています。GTPγS処理は、GTP結合型（活性型）でRasをトラップし、内在性Rasが存在する場合に強いシグナルを発生させます。GDP処理はRasをGDP結合状態（非活性状態）に押し上げるため、Rasのタンパク質レベルに関係なくシグナルがほとんどまたは全く得られません。このキットは、HRP標識二次抗体（ヤギ抗マウスIgG、製品番号31430）およびThermo Scientific SuperSignal West Pico化学発光基質（製品番号34080）を用いたウェスタンブロット検出用に最適化されています。各キットには、30回のプルダウンアッセイに十分なコンポーネントが含まれています。

キットのコンポーネントは、免疫蛍光染色にも使用できます。神経NS-1細胞をNGFで刺激し、キットに含まれるGST-RBDタンパク質と抗Ras抗体を使用して活性型Rasの空間分布を調べました。

Rasバックグラウンド：
ラット肉腫ウイルス性がん遺伝子にちなんで命名されたGTPaseのRasスーパーファミリーには、K-Ras、H-Ras、N-Rasなどの多くのRasアイソフォームが含まれています。3種類のアイソフォームはあらゆる種類の細胞でさまざまなレベルで発現しますが、一般的に、これらのアイソフォームの少なくとも1つの活性化変異がすべてのがんの約15%に存在します。Rasタンパク質は、細胞外分子からの細胞内シグナルを伝達するイニシエーターとして機能し、そのカルボキシ末端の脂質修飾とプレニル化を介して血漿膜と結合します。カルボキシ末端でのこれらの修飾は、Rasの異なる膜マイクロドメインへの局在を決定し、これがその後の下流シグナル伝達を決定します。Rasシグナル伝達経路は、増殖、生存、小胞輸送、遺伝子発現などの多くの細胞プロセスに影響します。

Rasを介したシグナル伝達は多くの細胞応答の中心となり、Rasの活性化はいくつかのGEFおよびGAPタンパク質によって制御されます。GEFタンパク質は、非活性のRasからGDPを解離させ、RasをGTPに結合させることで、GTPase活性化を促進します。逆に、GAPタンパク質はGTPをGDPに加水分解することでGTPaseを不活性化します。Rasは、RafやPI3キナーゼなどのエフェクタータンパク質と相互作用することで下流シグナル伝達を仲介します。Raf1は、MAPキナーゼキナーゼシグナル伝達経路の一部であるセリン／スレオニンプロテインキナーゼです。これがERKとp38の活性化を引き起こし、増殖と生存に影響を与えます。PI3キナーゼシグナル伝達は、細胞増殖と生存の中心となるAKTおよびmTORの活性化をもたらします。Rasは、免疫細胞の開発や機能など、細胞の分化や開発にも不可欠です。

詳細な製品データ
• 特定の下流エフェクターを介した低分子量GTPaseの活性化の測定
• 神経細胞分化における活性GTPaseの検出と局在化の測定