Active Rac1 Pull-Down and Detection Kit

Thermo Scientific活性型Rac1プルダウンおよび検出キットは、Pak1タンパク質結合ドメインとの特異的なタンパク質相互作用により、GTP結合Rac1 GTPaseの選択的濃縮と検出を可能にするキット一式です。

活性型Rac1プルダウンおよび検出キットには、精製したGST-Pak1タンパク質結合ドメイン（PBD）、グルタチオンアガロースレジン、ポジティブコントロールおよびネガティブコントロール（それぞれGTPγSおよびGDP）、溶解／結合／洗浄バッファー、抗Rac1一次抗体、SDSサンプルバッファー、スピンカラム、および収集チューブが含まれます。このキットは、堅牢なRac1活性を持つことが知られている細胞株、NIH3T3細胞のライセートを使用して検証されています。

活性型Rac1プルダウンおよび検出キットの特長：

•高感度かつ高精度 — 最適化された試薬、特異的抗Rac1抗体、およびウェスタンブロット法により、正確なコントロールと定量結果を保証
• 検証済み — 検査済みのRac1検出機能で品質と性能を保証
• 適合性 — マウス、ラット、およびヒト由来のさまざまな細胞タイプに対応

アプリケーション：
• 細胞の分化、移動、分裂、細胞骨格の再配列中のRac1 GTPaseの活性化の追跡
• Rac1依存性葉状仮足形成の研究
• がんおよび血管新生における活性型Rac1の役割の研究
• 増殖因子による刺激後のRac1活性のモニタリング
• 小分子阻害剤のRac1活性への影響のスクリーニング

活性型Rac1プルダウンおよび検出キットは、GTPγSで処理した細胞溶解物を使用して内因性Rhoを活性化し、GDP処理ライセートと比較して低分子量GTPaseを不活性化することにより、活性型Rac1濃縮方法の機能と特異性を検証しています。GTPγS処理は、GTP結合型（活性型）でRac1をトラップし、内在性Rac1が存在する場合に強いシグナルを発生させます。GDP処理はRac1をGDP結合状態（非活性状態）に押し上げるため、Rac1のタンパク質レベルに関係なくシグナルが最小限になるか、または全く得られません。このキットは、HRP標識二次抗体（ヤギ抗マウスIgG、製品番号31430）およびThermo Scientific SuperSignal West Pico化学発光基質（製品番号34080）を用いたウェスタンブロット検出用に最適化されています。キットには、30回のプルダウンアッセイに十分なコンポーネントが含まれています。

Rac1バックグラウンド：
RhoファミリーのGTPaseは、細胞シグナル伝達、転写調節、アクチン細胞骨格の構成など、多くの細胞機能を提供します。このGTPaseファミリーには、Rho（RhoA、RhoB、RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3、RhoG）、Cdc42（Cdc42およびG25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2、およびRhoE/Rnd3）、RhoBTBファミリー、およびMiroファミリーが含まれます。これらのGTPaseは、GPCR、チロシンキナーゼ、サイトカイン、および接着受容体を介して、血漿膜からサイトゾルへのシグナル伝達を可能にします。血漿膜への接着は、タンパク質のカルボキシ末端にあるゲラニルゲラニル脂質修飾により達成されます。RAC1活性化はアクチン重合をもたらし、細胞周辺では膜の波打ち現象が発生しているように見えます。また、RAC1活性化はラメラリポディア形成も引き起こします。

Rac1 GTPaseは、増殖因子（EGF、インスリン、PDGF、NGF）、インテグリン（フィブロネクチン）、または化学誘引物質（fMLP）で刺激した後、チロシンキナーゼ、接着分子、またはサイトカイン／ケモカイン受容体を介してシグナルを伝達します。例えば、EGFによる刺激は、PI3キナーゼの活性化をもたらし、細胞周辺での細胞の成長と再編成が発生します（膜の波打ち現象）。または、Rac1を介したチロシン受容体キナーゼシグナル伝達は、MAPKストレス応答経路SAPK（JNK）およびp38の活性化につながります。フィブロネクチンを使用して細胞を刺激することで、インテグリン媒介細胞が広がります。Rac1の主なエフェクタータンパク質のうちの2つは、Pak1とホスホイノシトール4-リン酸塩5-キナーゼです。Pak1（p65 Pak）はJNK経路を活性化するキナーゼであり、ホスホイノシトール4-リン酸塩5-キナーゼはアクチンフィラメントアセンブリを促進します。Racは、T細胞の開発や細胞の分化促進に不可欠です。しかし、GTPaseのRhoファミリーは、細胞シグナル伝達中にはアゴニスト的に作用し、分化中にはアンタゴニスト的に作用します。

詳細な製品データ
• 特定の下流エフェクターを介した低分子量GTPaseの活性化の測定
• 神経細胞分化における活性GTPaseの検出と局在化の測定