Active Cdc42 Pull-Down and Detection Kit

Thermo Scientific活性型Cdc42プルダウンおよび検出キットは、Pak1タンパク質結合ドメインとの特異的なタンパク質相互作用により、GTP結合Cdc42 GTPaseの選択的濃縮と検出を可能にするキット一式です。

活性型Cdc42プルダウンおよび検出キットには、精製したGST-Pak1タンパク質結合ドメイン（PBD）、グルタチオンアガロースレジン、ポジティブコントロールおよびネガティブコントロール（それぞれGTPγSおよびGDP）、溶解／結合／洗浄バッファー、抗Cdc42一次抗体、サンプルバッファー、スピンカラム、および収集チューブが含まれます。このキットは、堅牢なCdc42活性を持つことが知られている細胞株、NIH3T3細胞のライセートを使用して検証されています。

活性型Cdc42プルダウンおよび検出キットの特長：

•高感度かつ高精度 — 最適化された試薬、特異的抗Cdc42抗体、およびウェスタンブロット法により、正確なコントロールと定量結果を保証
• 検証済み — 検査済みのCdc42検出機能で品質と性能を保証
• 適合性 — マウス、ラット、およびヒト由来のさまざまな細胞タイプに対応

アプリケーション：
• 細胞の分化、移動、分裂、細胞骨格の再配列中のCdc42 GTPaseの活性化の追跡
• 糸状仮足形成中のCdc42の活性化の研究
• 増殖因子による刺激後のCdc42活性のモニタリング
• 小分子阻害剤のCdc42活性への影響のスクリーニング

活性型Cdc42プルダウンおよび検出キットは、GTPγSで処理した細胞溶解物を使用して内因性Cdc42を活性化し、GDP処理ライセートと比較して低分子量GTPaseを不活性化することにより、活性型Cdc42濃縮方法の機能と特異性を検証しています。GTPγS処理は、GTP結合型（活性型）でCdc42をトラップし、内在性Cdc42が存在する場合に強いシグナルを発生させます。GDP処理はCdc42をGDP結合状態（非活性状態）に押し上げるため、Cdc42のタンパク質レベルに関係なくシグナルが最小限になるか、または全く得られません。このキットは、HRP標識二次抗体（ヤギ抗マウスIgG、製品番号31430）およびThermo Scientific SuperSignal West Pico化学発光基質（製品番号34080）を用いたウェスタンブロット検出用に最適化されています。キットには、30回のプルダウンアッセイに十分なコンポーネントが含まれています。

Cdc42バックグラウンド：
RhoファミリーのGTPaseは、細胞シグナル伝達、転写調節、アクチン細胞骨格の構成など、多くの細胞機能を提供します。このGTPaseファミリーには、Rho（RhoA、RhoB、RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3、RhoG）、Cdc42（Cdc42およびG25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2、およびRhoE/Rnd3）、RhoBTBファミリー、およびMiroファミリーが含まれます。これらのGTPaseは、GPCR、チロシンキナーゼ、サイトカイン、および接着受容体を介して、血漿膜からサイトゾルへのシグナル伝達を可能にします。血漿膜への接着は、タンパク質のカルボキシ末端にあるゲラニルゲラニル脂質修飾により達成されます。Cdc42活性化は、アクチンフィラメントと糸状仮足形成の重合をもたらします。

RhoGTPaseのCdc42サブファミリーは、RhoファミリーやRacファミリーほど十分に特徴づけされていません。Cdc42とRac1は共にチロシン受容体キナーゼシグナル伝達によって活性化され、これがSAPKおよびp38ストレスキナーゼ経路の活性化につながります。またCdc42は、好中球中の化学誘引物質fMLPによっても活性化されます。フィブロネクチンはCdc42とRac1を活性化することで細胞増殖を誘導し、TNF-αとIL-1による刺激はアクチン細胞骨格の変化をもたらします。Cdc42とRac1は重複経路で作用するため、両者の間には有意なクロストークがあります。場合によっては、Cdc42はシグナル伝達中にRac1の上流に作用することがあります。Cdc42の主なエフェクタータンパク質は、Pak1、N-WASP、IQGAPなどです。Pak1は、SAPKストレス経路でのJNKの活性化に関与するキナーゼです。N-WASPは、フィラメント形成を誘導するエフェクターで、IQGAPは F-アクチンフィラメントと相互作用します。神経細胞の分化では、Cdc42が神経突起伸長において積極的な役割を果たします。しかし、GTPaseのRhoファミリーは、細胞シグナル伝達中にはアゴニスト的に作用し、分化中にはアンタゴニスト的に作用します。

詳細な製品データ
• 特定の下流エフェクターを介した低分子量GTPaseの活性化の測定