Active Rap1 Pull-Down and Detection Kit

Thermo Scientific Pierce活性型Rap1プルダウンおよび検出キットは、RalGDSタンパク質結合ドメインとの特異的なタンパク質相互作用により、GTP結合Rap1 GTPaseの選択的濃縮と検出を可能にするキット一式です。

活性型Rap1プルダウンおよび検出キットには、精製したGST-RalGDS Rapタンパク質結合ドメイン（RBD）、グルタチオンアガロースレジン、ポジティブコントロールおよびネガティブコントロール（それぞれGTPγSおよびGDP）、溶解／結合／洗浄バッファー、抗Rap1抗体、サンプルバッファー、スピンカラム、および収集チューブが含まれます。このキットは、堅牢なRap1活性を持つことが知られている細胞株、NIH3T3細胞のライセートを使用して検証されています。

活性型Rap1プルダウンおよび検出キットの特長：

•高感度かつ高精度 — 最適化された試薬、特異的抗Rap1抗体、およびウェスタンブロット法により、正確なコントロールと定量結果を保証
• 検証済み — 検査済みのRap1検出機能で品質と性能を保証
• 適合性 — マウス、ラット、およびヒト由来のさまざまな細胞タイプに対応

アプリケーション：
• 細胞の分化、移動、分裂、細胞骨格の再配列中のRap1 GTPaseの活性化の追跡
• 細胞結合と細胞接着における活性型Rap1シグナル伝達の研究
• 増殖因子による刺激後のRap1活性のモニタリング
• 小分子阻害剤のRap1活性への影響のスクリーニング

活性型Rap1プルダウンおよび検出キットは、GTPγSで処理した細胞溶解物を使用して内因性Rap1を活性化し、GDP処理ライセートと比較して低分子量GTPaseを不活性化することにより、活性型Rap1濃縮方法の機能と特異性を検証しています。GTPγS処理は、GTP結合型（活性）でRap1をトラップし、内在性Rap1が存在する場合に強いシグナルを発生させます。GDP処理はRap1をGDP結合状態（非活性）に押し上げるため、Rap1のタンパク質レベルに関係なくシグナルが最小限になるか、または全く得られません。このキットは、HRP標識二次抗体（ヤギ抗ウサギIgG、製品番号31460）およびThermo Scientific SuperSignal West Pico化学発光基質（製品番号34080）を用いたウェスタンブロット検出用に最適化されました。キットには、30回のプルダウンアッセイに十分なコンポーネントが含まれています。

Rapバックグラウンド：
Rap GTPase は、GTPaseのRasファミリーの一部で、Rap1a、Rap1b およびRAP2によってコード化されています。Rap GTPaseはRas GTPaseと構造的に類似しており、エフェクタータンパク質や活性化タンパク質も類似していますが、Rap GTPaseの機能活性はRasとは異なります。Rasは細胞増殖と生存に関与していますが、Rap1は細胞骨格の再配列、細胞接着、および細胞結合形成を調節します。

Rap1およびRasの特異性は、それぞれの上流調節因子と下流エフェクターによって媒介されます。RapのGEFにはCDC25相同ドメインが含まれており、GDP/GGTP交換反応とREMドメイン（Ras交換モチーフ）を媒介します。一部のRap GEFには、C3G、Epac1および2、RasGRP2、PDZ-GEF1および2、PLCεが含まれます。このキットで使用される結合ドメインはRalGDSです。これはRAドメインを含むGEFで、Rap1がRasより高い結合アフィニティーを示します。Rap1GAPとSpa-1ファミリーを含むRapGAPは、アスパラギン側鎖をヌクレオチド結合ポケットに挿入してGTP加水分解反応を触媒します。RAPL、Riam、AF-6、Krit1、RacGEF、Tiam1、Vav2、Rho Gaps、およびARAP3などのRapエフェクタータンパク質は、細胞間の結合と接着に関与し、多くの場合、膜または細胞間の結合部に局在します。Ras以外にも、Rho GTPaseとのクロストークがあります。

詳細な製品データ
• 特定の下流エフェクターを介した低分子量GTPaseの活性化の測定